【摘 要】
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目的构建华支睾吸虫cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础.方法提取华支睾吸虫总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒操作方法,进行反转录合成
【机 构】
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中山大学中山医学院病原生物学部,广州军区联勤部医学研究所,广西南宁寄生虫病研究所
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目的构建华支睾吸虫cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础.方法提取华支睾吸虫总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒操作方法,进行反转录合成双链cDNA;PCR产物纯化后,进行SfiⅠ酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度及鉴定.结果未扩增文库滴度达7.5×107 pf
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