【摘 要】
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【目的】应用CRISPR/Cas9方法,构建特异性靶向长链非编码RNA DANCR基因两端的双靶标慢病毒载体,稳定敲除间充质干细胞(MSC)中的DANCR基因,为研究DANCR的生物学功能奠定基础。
【机 构】
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中山大学中山医学院干细胞与组织工程研究中心
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2017YFA0105501);广东省科技计划项目(2015A020212019)
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【目的】应用CRISPR/Cas9方法,构建特异性靶向长链非编码RNA DANCR基因两端的双靶标慢病毒载体,稳定敲除间充质干细胞(MSC)中的DANCR基因,为研究DANCR的生物学功能奠定基础。【方法】首先设计靶向DANCR的5’和3’端的sgRNA(single-guide RNA),转染293FT细胞,提取293FT细胞基因组DNA,验证靶向序列的有效性。然后通过gateway和酶切连接的方法,将分别靶向5’和3’端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体。最终使用293FT进行慢
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