【摘 要】
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[目的]建立一种检测鸭IFN-βmRNA转录水平的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法.[方法]根据GenBank中鸭IFN-β(KT428159)核苷酸序列设计并合成特异性引物,将鸭IFN-β基因克隆至pET-30a载体,以此构建的pET-30a-IFN-β阳性重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测,构建标准曲线,并进行引物特异性、灵敏度及重复性试验.[结果]该扩增特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线单峰(Tm=87.94±0.16℃);
【机 构】
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福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建 福州 350013
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[目的]建立一种检测鸭IFN-βmRNA转录水平的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法.[方法]根据GenBank中鸭IFN-β(KT428159)核苷酸序列设计并合成特异性引物,将鸭IFN-β基因克隆至pET-30a载体,以此构建的pET-30a-IFN-β阳性重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测,构建标准曲线,并进行引物特异性、灵敏度及重复性试验.[结果]该扩增特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线单峰(Tm=87.94±0.16℃);Ct值在8.9～34.0线性拟合程度高,相关系数R2>99.5％;灵敏度高,最低检测限为2.84 copies·μL-1;重复性好,对来自临床的3种组织样品检测的组内变异系数小于0.13％,组间变异系数不超过1％.[结论]该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为鸭IFN-βmRNA表达水平的定量分析提供了技术手段.
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