【摘 要】
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目的 建立Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液特异性鉴别试验的RT-PCR法，并对该方法进行验证。方法 根据GIAIDS数据库中新型冠状病毒Omicron株及其他突变株和原型株的S基因序列差异设计并合成引物OSTF1、OS1R，提取Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液病毒RNA，逆转录为cDNA，利用对Omicron株S蛋白基因序列中的特异性插入及缺失核苷酸
【基金项目】
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国家重点研发计划（2020YFC0842100）； 湖北省科技重大专项（2021ACB005）；
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目的 建立Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液特异性鉴别试验的RT-PCR法，并对该方法进行验证。方法 根据GIAIDS数据库中新型冠状病毒Omicron株及其他突变株和原型株的S基因序列差异设计并合成引物OSTF1、OS1R，提取Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液病毒RNA，逆转录为cDNA，利用对Omicron株S蛋白基因序列中的特异性插入及缺失核苷酸序列设计的引物对进行PCR扩增，扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。对建立的RT-PCR法进行重复性、中间精密度、专属性、耐用性及灵敏度验证，并用该方法鉴别6批Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗原液。结果 Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液利用引物OSTF1/OS1R进行RT-PCR检测，可扩增出约460 bp的条带，而原型株、Beta株、Delta株新型冠状病毒灭活疫苗原液（Vero细胞）均无法扩增出条带；重复3次检测、2名实验人员分别在3 d重复3次检测、利用3种不同退火温度进行RT-PCR,Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液均可扩增出约460 bp的条带；原液蛋白浓度在0.04μg/mL以上、RNA浓度在0.128 ng/μL以上均可扩增出较亮的约460 bp的条带；6批Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液经RT-PCR检测，均可见约460 bp的条带。结论 RT-PCR法专属性、重复性、中间精密度、耐用性和灵敏度均良好，可用于Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）原液鉴别。
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