【摘 要】
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目的 探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性.方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞.以NucleofectorTM技术转染pEGFP-C2(EGFP组),以同期培养未转染的细胞作为对照组.测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率.结果在转染后24 h成功发现EGFP的表达.两组细胞具有相似的形态
【机 构】
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目的 探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性.方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞.以NucleofectorTM技术转染pEGFP-C2(EGFP组),以同期培养未转染的细胞作为对照组.测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率.结果在转染后24 h成功发现EGFP的表达.两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线.EGFP的表达逐渐增强,至第6天达到最高峰(47.8%),观察一个月未发现表达减弱.结论pEGFP-C2基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响;EGFP可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记;NucleofectorTM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。
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