【摘 要】
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背景与目的:近年研究表明,EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)潜伏性膜蛋白基因(latentmembraneproteingene,LMP)在鼻咽癌的发生和发展中起着重要作用。本研究着重构建体外基因反
【机 构】
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中山大学肿瘤防治中心,Cancer Center North Carolina University,Cancer Institute Birmingham University,中山大学肿瘤防治中心
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背景与目的:近年研究表明,EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)潜伏性膜蛋白基因(latentmembraneproteingene,LMP)在鼻咽癌的发生和发展中起着重要作用。本研究着重构建体外基因反义转录系统,研究反义LMPmRNA对EBV转化细胞基因表达的抑制作用。方法:构建和制备反义核酸单链有效的体外转录系统;设计和建立反义原位示踪技术,以探测正、反义链配对互补聚合体的定位;通过对EBV转化细胞系(C1936和B95-8)的反义控制,测定细胞生长的抑制率,观测转化细胞凝集表型;通过对EBV-LMP基因表达的检测和MTT吸收活性的测试,测定转化细胞在基因转录下调之后的生存状态。结果:构建成制备反义RNA的SP6/T7双向启动子的体外基因转录系统。反义工程产物AsLMPmRNA通过胞饮作用掺入转化细胞后,经原位示踪显示,正-反义链聚合物的封闭位点主要在mRNA前体剪接加工成熟的后阶段;转化细胞增殖能力下降(生长抑制率85.5%),细胞转化的凝集表型受抑制,MTT吸收值显著降低,显示被反义控制的C1936和B95-8细胞系的生长受到严重的抑制。应用反义原位示踪系统(antisensetracingsysteminsitu,ATSIS)显示,AsLMPmRNA有特定靶点和抑制效应。结论:本实验所建成的体外反义转录系统所制备的RNA反义工程产物(AsLMPmRNA),有特定的选择靶点作用和高效的生物活性(
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