【摘 要】
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检测特异DNA片段的方法中,传统Southern blot技术由于其高度可重复性及能够显示条带大小的特性,一直是DNA检测的"黄金标准"。但是杂交时间长,步骤复杂,放射性污染等问题亟待
【机 构】
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四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31070276)
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检测特异DNA片段的方法中,传统Southern blot技术由于其高度可重复性及能够显示条带大小的特性,一直是DNA检测的"黄金标准"。但是杂交时间长,步骤复杂,放射性污染等问题亟待解决。为了简化Southern blot,研究使用了一种液相杂交快速检测DNA的方法,即使用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP掺入探针后,在溶液中与待检测DNA样本42℃下杂交,然后琼脂糖凝胶电泳检测荧光杂交信号。利用质粒为模板,优化了探针制作、杂交液组成、杂交时间和温度等参数。在FITC-dUTP:dTTP比例为1∶3、模板质粒浓度为50μg、1×杂交缓冲液(25mmol/LTris,10mmol/L EDTA,8mmol/L Nacl,PH=8.0)中95℃变性5～9 min和42℃杂交3h的实验条件下,可检出1.2μg的质粒,探针灵敏度为7.3ng/μl。这种方法不需要转膜,曝光,大大节约了时间,简化了操作,荧光检测也为该方法同时检测多色样本提供了可能,可广泛应用于核酸检测。
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