【摘 要】
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目的 探讨绞股蓝皂苷A(GpA)对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路的调控作用.方法 采用白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的GpA处理细胞,pcDNA、pcDNA-TTTY15分别转染入软骨细胞后用GpA与IL-1β共同处理细胞;qRT-PCR法检测TTTY15、miR-335-5p的表达量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的水平;用试剂盒检测SOD、MDA的水平;CCK-
【机 构】
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272000 山东省济宁市,济宁医学院附属医院骨关节科;山东省桓台县人民医院骨二科
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目的 探讨绞股蓝皂苷A(GpA)对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路的调控作用.方法 采用白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的GpA处理细胞,pcDNA、pcDNA-TTTY15分别转染入软骨细胞后用GpA与IL-1β共同处理细胞;qRT-PCR法检测TTTY15、miR-335-5p的表达量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的水平;用试剂盒检测SOD、MDA的水平;CCK-8实验、流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测TTTY15与miR-335-5p的靶向关系;Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量.结果 IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-6、MDA的水平升高(P<0.05),凋亡率与Bax蛋白水平升高(P<0.05),TTTY15的表达水平升高(P<0.05),而SOD的活性与细胞存活率降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),miR-335-5p的表达水平降低(P<0.05);随着GpA浓度的升高IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-6、MDA的水平降低(P<0.05),凋亡率与Bax蛋白水平降低(P<0.05),TTTY15的表达水平降低(P<0.05),而SOD的活性与细胞存活率升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),miR-335-5p的表达水平升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;TTTY15可靶向调控miR-335-5p;TTTY15过表达可通过降低miR-335-5p的表达而逆转GpA对IL-1β诱导的软骨细胞炎性因子、氧化应激、细胞存活率及凋亡的作用.结论 绞股蓝皂苷A可通过调控TTTY15/miR-335-5p通路而抑制炎性反应、氧化应激、凋亡及促进细胞增殖进而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤.
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