单增李斯特菌双元调控系统hssS/hssR缺失株的构建及其生物学特性

来源 :畜牧兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:skykingzx6103
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的食源性人畜共患病原菌,可抵抗外界多种不利因素的影响,如酸、碱、渗透压和氧化应激.双元调控系统(two-component system,TCS)是细菌适应环境的重要调控系统,为了探明双元调控系统HssS/HssR对单增李斯特菌抗应激能力及毒力的影响,本研究以单增李斯特菌10403S为亲本株,利用同源重组技术构建了hssS/hssR基因缺失株,并对其部分生物学特性进行了研究.生长曲线结果显示,在氧化应激(20 mmol·L-1 H2O2)条件下,缺失株ΔhssS/hssR的生长能力减弱;应激存活试验结果显示,在20 mmol·L-1 H2O2条件下应激处理1 h后,缺失株ΔhssS/hssR的生长率显著低于亲本株(PP<0.01);小鼠巨噬细胞内吞及增殖试验结果显示,hssS/hssR基因缺失显著增强单增李斯特菌抗巨噬细胞吞噬的能力(P<0.01)并显著增强其在巨噬细胞内的增殖能力(P<0.05);鸡胚毒力试验结果显示,亲本株的LD50为102.2,缺失株的LD50为101.4,且缺失株对鸡胚肝的定殖能力显著高于亲本株(P<0.01),表明hssS/hssR基因缺失能显著增强单增李斯特菌的毒力.综上表明,双元调控系统HssS/HssR介导单增李斯特菌抗氧化应激作用与毒力.
其他文献
旨在初步探究猪m6A甲基化酶METTL3基因表达水平与脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)损伤的关系.本研究构建了稳定干扰METTL3基因表达水平的IPEC-J2细胞系,用1 μg·mL-1 DON诱导METTL3干扰组和对照组猪肠上皮细胞48 h,通过实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因、免疫相关基因、抗氧化酶相关基因表达水平,同时测定细胞增殖活性、细胞周期、细胞凋亡以及活性氧(ROS)水平.结果显示,与对照组相比,干扰组免疫相关基因TNF-a、I
旨在比较放牧条件下不同年龄间黑藏羊肉品质与肌纤维组织学特性的差异.本研究选择青海自然放牧条件下体况良好的初生黑藏羊(平均体重(2.31±0.49)kg)和12月龄黑藏羊(平均体重(36.58±1.26)kg)各5只,依据年龄分为2组,即羔羊组(lamb)和成年羊组(adult).通过三磷酸腺苷酶(ATPase)染色、酶联免疫吸附(en-zyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法以及实时荧光定量PCR(real-time qPCR)技术分析羔羊和成年羊背最长肌营养成分、抗
染色质开放性是指核小体或转录因子等蛋白与真核生物染色质DNA结合后,对其他蛋白能否再结合的开放程度,这一特性能够反映转录活性.染色质结构是动态变化的,染色质开放性与动物生长发育、细胞分化等过程密切相关,基因组开放染色质高效精准定位可为解析基因表达调控机制提供重要线索.本文介绍染色质开放性检测方法、染色质开放性的影响因素,重点阐述染色质开放性与动物发育的关系并对其发展及应用前景进行阐述,以期为动物发育基因表达调控等相关研究提供参考依据.
旨在建立牦牛皮下和肌内前体脂肪细胞的体外研究模型,并检测两部位前体脂肪细胞分化过程中关键基因表达量差异,为研究牦牛不同部位脂肪沉积的分子机制提供试验材料和理论依据.本研究通过采取5头18~22月龄健康麦洼公牦牛的皮下脂肪组织和背最长肌组织,利用胶原酶消化,分离皮下和肌内前体脂肪细胞,随后根据细胞来源将细胞分为肌内组和皮下组,对其进行免疫荧光鉴定、生长曲线绘制、脂肪细胞油红O鉴定以及使用实时荧光定量技术检测分化关键基因PPARγ、C/EBPα、FASN、HSL的表达.结果表明,牦牛皮下和肌内前体脂肪细胞分离
旨在分析共轭亚油酸(CLA)诱导奶牛低脂乳症对牛乳脂肪球膜甘油磷脂含量的影响.选取体况相近、泌乳中期的10头荷斯坦奶牛进行自身前后对照设计,试验期12 d,第1天至第6天每头牛饲喂基础日粮+CLA 400 g·d-1,第7天至第12天恢复为饲喂基础日粮,每天记录产奶量及采食量,分析乳成分及乳脂肪球(MFG)粒径参数,对1、7、12 d的乳样采用质谱分析甘油磷脂含量.结果表明,饲喂CLA处理前后对奶牛的产奶量、采食量及乳蛋白、乳糖含量没有显著影响(P>0.05),但显著降低了奶牛的乳脂率(P<0.05).脂
旨在对西农萨能奶山羊Zfy基因进行克隆和生物信息学分析,并利用CRISPR/Cas9技术成功获得敲除Zfy基因的奶山羊成纤维细胞株,为进一步探索Zfy基因功能及性别调控提供基础数据.本研究以健康的西农萨能奶山羊为对象,采集3只3月龄公山羊睾丸组织并提取总RNA.根据NCBI中预测的山羊Zfy基因mRNA序列信息(GenBank登录号:XM_018044893)设计引物,利用RT-PCR技术分段克隆获得山羊Zfy基因序列,使用相关生物信息学软件分析Zfy基因CDS区核苷酸序列并预测其蛋白质的结构和功能.针对
旨在分析荷斯坦公牛X和Y精子核形态(包括精子大小和形状)及其差异,探究流式分选及分选后冷冻对公牛X和Y精子核形态的影响.本研究使用荧光显微镜拍摄15头年龄相当、健康状况良好的荷斯坦公牛X和Y精子冷冻前后及新鲜精液分选前后共6类精子核图像,利用Image J插件Nuclear Morphology Analysis分析3.7万个精子核图像与形态相关的8个指标信息.结果显示,X和Y精子核形态具有显著性差异(P<0.05)的公牛数量比例少于50%.流式分选后8头(8/11)公牛的精子核面积、周长和长度发生显著性
旨在制备毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)配子体抗原EnGAM22单克隆抗体,用Ni-NTA亲和层析纯化的重组抗原rEnGAM22免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用预先建立的ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行4次亚克隆后,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株并命名为2F3和3D3;对单抗亚类和特异性进行鉴定,应用单抗识别天然蛋白和虫体定位.结果显示,单克隆抗体2F3和3D3亚类分别为IgG2a、IgG2b,纯化
基于丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)贵州株的LppA蛋白N末端基因,构建真核重组表达质粒pVAX1-LppA,并对免疫效果进行分析,为防控羊支原体肺炎提供新思路.以构建的真核重组表达质粒pVAX1-LppA(50、100、150 μg)、pVAX1空载体、无菌PBS分别免疫小鼠.通过ELISA方法检测小鼠血清中抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平,MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞占总细胞数
旨在分离1株可裂解blaNDM-5及mcr-1阳性大肠杆菌的噬菌体,探究该噬菌体的生物学特性,为防控blaNDM-5及mcr-1阳性大肠杆菌感染提供新的技术思路.对分离出的噬菌体进行透射电镜观察、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性试验及全基因组测序分析.结果显示:成功分离出1株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-ZQ1,该噬菌体属于有尾病毒目,肌尾病毒科,其最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,裂解期为10 min,裂解量为92 PFU·cell-1.在温度4~55℃、pH4~10条件下,该噬菌体都有