【摘 要】
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目的 在已知烟草节杆菌02181肌酸酶基因部分序列的基础上,从烟草节杆菌02181基因组DNA中克隆得到肌酸酶全基因.方法 根据已得到的肌酸酶部分序列,利用基因组步移技术,分别克
【机 构】
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张家口解放军第二五一医院检验科,第三军医大学检验系临床生物化学教研室
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目的 在已知烟草节杆菌02181肌酸酶基因部分序列的基础上,从烟草节杆菌02181基因组DNA中克隆得到肌酸酶全基因.方法 根据已得到的肌酸酶部分序列,利用基因组步移技术,分别克隆得到肌酸酶基因已知部分序列的上、下游序列,再将3段序列拼接,得到肌酸酶全基因,并在NCBI上检索证实.结果 得到的烟草节杆菌02181肌酸酶基因的全长序列,在NCBI上检索后证实为一新基因,该基因全长1 254 bp(含终止密码子TAA),为一完整的开放读码框架(ORF),编码417个氨基酸,理论分子量为46 377 Da,并与多种不同来源的肌酸酶有着较高的同源性.其中,与Arthrobacter sp.FB24来源的肌酸酶氨基酸序列的一致性达到了80%(332/417),同源性则达到了87%(365/417).结论 成功地克隆了烟草节杆菌02181肌酸酶基因,为今后的基因表达奠定了基础,也为肌酐测定试剂的国产化迈出了坚实的一步.
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