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【摘 要】目的：观察参枣宁胶囊对动物是否具有改善睡眠功能。方法：选用雌性KM小鼠随机分为400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200mg/kg.BW三個剂量组和一个阴性对照组，每组40只，连续30天经口灌胃给予动物后，比较试验组动物的睡眠时间、睡眠发生率及睡眠潜伏期与对照组之间的差异性，评价受试物与戊巴比妥钠（或巴比妥钠）是否具有协同改善睡眠作用。结果：中、高剂量组的睡眠时间（36.70±12.02min，35.34±12.53min）与阴性对照组（22.15±7.94min）比较，延长有显著性差异时间（F=3.695，P<0.05）；低、高剂量组的睡眠潜伏期时间（20.42±2.88min，20.23±4.04min）与阴性对照组比较（24.41±2.43min），能显著缩短小鼠睡眠潜伏期时间（F=3.066，P<0.05），没有出现直接睡眠现象。结论：参枣宁胶囊对动物具有改善睡眠功能。
【关键词】参枣宁；酸枣仁；刺五加；人参；KM小鼠；睡眠功能
【中图分类号】R151 【文章编号】1004-7484（2014）04-2419-01
Experimental Study on the Improvement Sleep Function of Mouse by Shenzaoning Capsules
Zhongren Jiang， Yujie Ge， Mingwu Jing， Wei Xu， Runsheng Lu， Yuehong Wu
（Sichuan Center for Disease Control and Prevention， Chengdu 610041， Sichuan.）
【Abstract】Objective：To evaluate the sleep improvement function of mice by shenzaoning capsule. Methods：Healthy female KM mice were given shenzaoning capsule by oral gavage at dosages of 0， 400mg/kg.BW， 800mg/kg.BW and 1200mg/kg.BW for 30 days. The effect of direct sleep， prolonged sleeping time induced by pentobarbital sodium， the sleeping rate under the threshold hypnogenesis dosage of pentobarbital sodium and sleep delitescence induced by pentobarbital sodium were observed. Results：Significant prolonging of the sleeping time was observed in high doses （35.34±12.53min，P<0.05） and middle doses （36.70±12.02min，P<0.05）， and sleep delitescence was reduced in high doses （20.23±4.04min，P<0.05） and low doses （20.42±2.88min，P<0.05）， while the direct sleeping effect was negative. Conclusions：Shenzaoning capsule could improve sleep of mice to a certain degree.
【Key Words】shenzaoning capsule； spina date seed； acanthopanax； ginseng； mice； sleep improvement
随着社会竟争和工作压力等诸多因素的影响，睡眠状态不佳的人群逐年增加，睡眠障碍严重威胁人群身体健康，目前治疗睡眠障碍的方法介绍比较多，有物理疗法和药物疗法[1，2，3]。研发生产具有改善睡眠功能的营养保健品备受广泛关注。参枣宁胶囊就是针对睡眠状态不佳的人群加工制成的保健营养品，对动物是否具有改善睡眠功能尚未见报道。本文选用雌性KM小鼠进行了睡眠功能方面的研究，为开发该产品的改善睡眠功能提供评价依据。
1材料和方法
1.1材料 参枣宁胶囊由陕西某健康药业有限公司提供，人体每日推荐量为2400mg/Kg.BW。雌性KM小鼠由成都达硕生物科技有限公司提供，动物合格证号为SCXK（川）2008-24.SPF级。
戊巴比妥钠由SIGMA-ALDRICH生产（批号为P3761）；巴比妥钠由国药集团化学试剂有限公司生产（批号为F20070124）。动物饲料由四川省医学科学院.四川省人民医院实验动物研究所提供，生产许可证号为SCXK（川）2010-01；实验动物房使用许可证号为SYXK（川）2011-043.屏障系统。
1.2方法 按照国家卫生部2003年颁布的《改善睡眠功能检验方法》进行[4]。直接睡眠试验、延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验及巴比妥钠睡眠潜伏期试验，均设400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200mg/kg.BW三个剂量组（分别相当于人体推荐量的10、20、30倍）。每套试验每个组各10只动物。三个剂量组给予不同剂量的受试物，对照组同法给予蒸馏水，每日按20ml/kg.BW经口灌胃一次，连续30天。
1.2.1 直接睡眠试验：各组动物分别给予不同剂量的受试物，对照组给予同体积的蒸馏水后，以小鼠翻正反射消失（当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位，如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠）为指标，观察各受试物组是否出现睡眠现象。 1.2.2 延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验：各组动物于末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW腹腔注射戊巴比妥钠53mg/kg.BW（经预试所得），以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试物能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。
1.2.3 戊巴比妥钠阈下劑量催眠试验：各组动物于末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量42.5mg/kg.BW（经预试所得），记录30分钟内翻正反射消失达1分钟以上入睡动物数。
1.2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期试验：动物末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW给各组动物腹腔注射巴比妥钠396mg/kg.BW（经预试所得），以翻正反射消失为指标，观察受试物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。
1.3 试验数据统计：睡眠时间和体重的数据经方差齐性检验，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用 Dunnett，s T3法进行两两比较。睡眠发生率用X2检验，以上数据均由SPSS 11.0 for Windows软件包处理。
2 结果
2.1动物的一般表现、直接睡眠现象及对体重的影响：
结果见表1，受试物连续30天经口灌胃给予动物后，没有发现动物出现直接睡眠现象。动物精神状态正常，观察期内各组动物生长发育正常，体重持续增长，没有发现对动物体重有显著性影响。
2.2参枣宁胶囊延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验
结果见表2，三个剂量组动物的睡眠时间与阴性对照组比较，可见中、高剂量组能显著延长睡眠时间（F=3.695，P<0.05）。
2.3参枣宁胶囊戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验
结果见表3，三个剂量组的小鼠睡眠发生率与阴性对照组比较，各剂量组的小鼠睡眠发生率均无明显差异（x2=2.027，P>0.05）。
2.4参枣宁胶囊巴比妥钠睡眠潜伏期试验
结果见表4，三个剂量组的小鼠睡眠潜伏期与阴性对照组比较，可见中、高剂量组能显著缩短睡眠潜伏期时间（F=3.066，P<0.05）。
3 讨论
参枣宁胶囊是以酸枣仁、刺五加、人参、五味子等为主要原料经粉碎、提取、浓缩等主要工艺加工而成的保健营养品。参枣宁胶囊改善小鼠睡眠的研究结果表明，中、高剂量组能在（戊）巴比妥钠催眠的基础上，显著延长小鼠的睡眠时间及显著缩短睡眠潜伏期时间，且无直接睡眠现象，提示受试物能改善动物的睡眠状态，说明该受试物与戊巴比妥钠有协同延长睡眠时间的作用，与巴比妥钠有协同缩短睡眠潜伏期的作用。这可能与受试物中所含的总皂苷等功效成分有关。据药典记载[5]，酸枣仁含有酸枣仁皂苷A和斯皮诺素，刺五加中含有紫丁香苷、五味子中含有五味子醇甲以及人参中含有人参皂苷Rg和Re等生物活性物质，这些活性物质具有补肝补肾和宁心安神等功能，主要用治疗虚烦不眠、惊悸失眠多梦等。
本研究受到实验环境条件和动物自身固有的生物学特征及习性等诸多因素的影响，动物对受试样品的反应存在种属、性别、年龄等方面的差异，年龄大的动物中枢神经反应不敏感[4]；这与葛宇杰等作者的报道结果一致[6]。该报道用雌性KM小鼠研究了动物体重对戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验的影响，结果表明小体重动物对戊巴比妥钠的敏感性及催眠率明显大于大体重动物。本研究中各剂量组的睡眠发生率与对照组之间没有显著性差异，是否与预试验及正式试验之间的动物体重有关，尚需进一步研究。为了尽量减少环境因素及动物体质等诸多因素对试验结果的干扰，实验环境必须恒温、恒湿、安静，动物必须保证质量，同时还应保证各剂量组与对照组之间、预试验与正式试验之间动物体重的均衡性。
参考文献：
[1] 郑洲会 睡眠障碍的综合治疗[J].中国医学创新.2012，9（1）：127-128
[2] 姚丽丽，张艳霞.“三联疗法”促进失眠患者睡眠的临床观察[J]，中国误诊学杂志，2010，10（25）：60-69
[3] 秦岭.体位疗法简便易行治失眠[J]，家庭医学，2010（1）：54-55
[4] 中华人民共和国卫生部，保健食品检验与评价技术规范[S]，2003：81-83
[5 中华人民共和国药典[S]，2010年版（一部）：62-344
[6] 葛宇杰，敬明武，欧世平，等.小鼠体重对睡眠实验的影响[J].职业卫生与病伤.2007，22（3）：197-198.
作者简介：
蒋中仁（男，1962-），主任技师，主要从事卫生毒理
【关键词】参枣宁；酸枣仁；刺五加；人参；KM小鼠；睡眠功能
【中图分类号】R151 【文章编号】1004-7484（2014）04-2419-01
Experimental Study on the Improvement Sleep Function of Mouse by Shenzaoning Capsules
Zhongren Jiang， Yujie Ge， Mingwu Jing， Wei Xu， Runsheng Lu， Yuehong Wu
（Sichuan Center for Disease Control and Prevention， Chengdu 610041， Sichuan.）
【Abstract】Objective：To evaluate the sleep improvement function of mice by shenzaoning capsule. Methods：Healthy female KM mice were given shenzaoning capsule by oral gavage at dosages of 0， 400mg/kg.BW， 800mg/kg.BW and 1200mg/kg.BW for 30 days. The effect of direct sleep， prolonged sleeping time induced by pentobarbital sodium， the sleeping rate under the threshold hypnogenesis dosage of pentobarbital sodium and sleep delitescence induced by pentobarbital sodium were observed. Results：Significant prolonging of the sleeping time was observed in high doses （35.34±12.53min，P<0.05） and middle doses （36.70±12.02min，P<0.05）， and sleep delitescence was reduced in high doses （20.23±4.04min，P<0.05） and low doses （20.42±2.88min，P<0.05）， while the direct sleeping effect was negative. Conclusions：Shenzaoning capsule could improve sleep of mice to a certain degree.
【Key Words】shenzaoning capsule； spina date seed； acanthopanax； ginseng； mice； sleep improvement
随着社会竟争和工作压力等诸多因素的影响，睡眠状态不佳的人群逐年增加，睡眠障碍严重威胁人群身体健康，目前治疗睡眠障碍的方法介绍比较多，有物理疗法和药物疗法[1，2，3]。研发生产具有改善睡眠功能的营养保健品备受广泛关注。参枣宁胶囊就是针对睡眠状态不佳的人群加工制成的保健营养品，对动物是否具有改善睡眠功能尚未见报道。本文选用雌性KM小鼠进行了睡眠功能方面的研究，为开发该产品的改善睡眠功能提供评价依据。
1材料和方法
1.1材料 参枣宁胶囊由陕西某健康药业有限公司提供，人体每日推荐量为2400mg/Kg.BW。雌性KM小鼠由成都达硕生物科技有限公司提供，动物合格证号为SCXK（川）2008-24.SPF级。
戊巴比妥钠由SIGMA-ALDRICH生产（批号为P3761）；巴比妥钠由国药集团化学试剂有限公司生产（批号为F20070124）。动物饲料由四川省医学科学院.四川省人民医院实验动物研究所提供，生产许可证号为SCXK（川）2010-01；实验动物房使用许可证号为SYXK（川）2011-043.屏障系统。
1.2方法 按照国家卫生部2003年颁布的《改善睡眠功能检验方法》进行[4]。直接睡眠试验、延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验及巴比妥钠睡眠潜伏期试验，均设400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200mg/kg.BW三个剂量组（分别相当于人体推荐量的10、20、30倍）。每套试验每个组各10只动物。三个剂量组给予不同剂量的受试物，对照组同法给予蒸馏水，每日按20ml/kg.BW经口灌胃一次，连续30天。
1.2.1 直接睡眠试验：各组动物分别给予不同剂量的受试物，对照组给予同体积的蒸馏水后，以小鼠翻正反射消失（当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位，如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠）为指标，观察各受试物组是否出现睡眠现象。 1.2.2 延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验：各组动物于末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW腹腔注射戊巴比妥钠53mg/kg.BW（经预试所得），以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试物能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。
1.2.3 戊巴比妥钠阈下劑量催眠试验：各组动物于末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量42.5mg/kg.BW（经预试所得），记录30分钟内翻正反射消失达1分钟以上入睡动物数。
1.2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期试验：动物末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW给各组动物腹腔注射巴比妥钠396mg/kg.BW（经预试所得），以翻正反射消失为指标，观察受试物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。
1.3 试验数据统计：睡眠时间和体重的数据经方差齐性检验，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用 Dunnett，s T3法进行两两比较。睡眠发生率用X2检验，以上数据均由SPSS 11.0 for Windows软件包处理。
2 结果
2.1动物的一般表现、直接睡眠现象及对体重的影响：
结果见表1，受试物连续30天经口灌胃给予动物后，没有发现动物出现直接睡眠现象。动物精神状态正常，观察期内各组动物生长发育正常，体重持续增长，没有发现对动物体重有显著性影响。
2.2参枣宁胶囊延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验
结果见表2，三个剂量组动物的睡眠时间与阴性对照组比较，可见中、高剂量组能显著延长睡眠时间（F=3.695，P<0.05）。
2.3参枣宁胶囊戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验
结果见表3，三个剂量组的小鼠睡眠发生率与阴性对照组比较，各剂量组的小鼠睡眠发生率均无明显差异（x2=2.027，P>0.05）。
2.4参枣宁胶囊巴比妥钠睡眠潜伏期试验
结果见表4，三个剂量组的小鼠睡眠潜伏期与阴性对照组比较，可见中、高剂量组能显著缩短睡眠潜伏期时间（F=3.066，P<0.05）。
3 讨论
参枣宁胶囊是以酸枣仁、刺五加、人参、五味子等为主要原料经粉碎、提取、浓缩等主要工艺加工而成的保健营养品。参枣宁胶囊改善小鼠睡眠的研究结果表明，中、高剂量组能在（戊）巴比妥钠催眠的基础上，显著延长小鼠的睡眠时间及显著缩短睡眠潜伏期时间，且无直接睡眠现象，提示受试物能改善动物的睡眠状态，说明该受试物与戊巴比妥钠有协同延长睡眠时间的作用，与巴比妥钠有协同缩短睡眠潜伏期的作用。这可能与受试物中所含的总皂苷等功效成分有关。据药典记载[5]，酸枣仁含有酸枣仁皂苷A和斯皮诺素，刺五加中含有紫丁香苷、五味子中含有五味子醇甲以及人参中含有人参皂苷Rg和Re等生物活性物质，这些活性物质具有补肝补肾和宁心安神等功能，主要用治疗虚烦不眠、惊悸失眠多梦等。
本研究受到实验环境条件和动物自身固有的生物学特征及习性等诸多因素的影响，动物对受试样品的反应存在种属、性别、年龄等方面的差异，年龄大的动物中枢神经反应不敏感[4]；这与葛宇杰等作者的报道结果一致[6]。该报道用雌性KM小鼠研究了动物体重对戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验的影响，结果表明小体重动物对戊巴比妥钠的敏感性及催眠率明显大于大体重动物。本研究中各剂量组的睡眠发生率与对照组之间没有显著性差异，是否与预试验及正式试验之间的动物体重有关，尚需进一步研究。为了尽量减少环境因素及动物体质等诸多因素对试验结果的干扰，实验环境必须恒温、恒湿、安静，动物必须保证质量，同时还应保证各剂量组与对照组之间、预试验与正式试验之间动物体重的均衡性。
参考文献：
[1] 郑洲会 睡眠障碍的综合治疗[J].中国医学创新.2012，9（1）：127-128
[2] 姚丽丽，张艳霞.“三联疗法”促进失眠患者睡眠的临床观察[J]，中国误诊学杂志，2010，10（25）：60-69
[3] 秦岭.体位疗法简便易行治失眠[J]，家庭医学，2010（1）：54-55
[4] 中华人民共和国卫生部，保健食品检验与评价技术规范[S]，2003：81-83
[5 中华人民共和国药典[S]，2010年版（一部）：62-344
[6] 葛宇杰，敬明武，欧世平，等.小鼠体重对睡眠实验的影响[J].职业卫生与病伤.2007，22（3）：197-198.
作者简介：
蒋中仁（男，1962-），主任技师，主要从事卫生毒理