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【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2015）04
【摘要】目的： 建立板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的HPLC含量测定方法。方法：色谱柱为Agilent C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.02%磷酸溶液（4.5：95.5），检测波长为245nm，柱温为30℃，流速为1.0mL·min- 1。结果： （R，S）-告依春在0.02392 ～ 0.23916 μg的范围内与峰面积值成良好的线性关系（ r=0.9997） ，平均加样回收率（n=6）为101.2%，RSD为3.2%。结论： 该方法简单、准确、专属性强，作为板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的含量测定方法，为板蓝根颗粒的生产提供内控指标。
【关键词】板蓝根颗粒浸膏；（R，S）-告依春；含量测定
板蓝根颗粒为板蓝根单方制剂。《中国药典》2010年版板蓝根颗粒功能主治为具有清热解毒，凉血利咽的功效。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者 [1] 。其制法为水提后浓缩，用60%乙醇醇沉后，取上清液浓缩至浸膏。与辅料混合制粒而成。有研究报道，（R，S）-告依春为板蓝根中的抗病毒活性成分[2]。为了控制本品浸膏的质量，以（R，S）-告依春的含量为考察指标，建立本品浸膏中（R，S）-告依春的含量方法，为板蓝根颗粒的的生产提供内控指标。
1 仪器和试药
戴安Ultimate 3000型高效液相色谱仪，Agilent C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm），AE200型十万分之一分析天平（瑞士梅特勒公司），XP26型百万分之一分析天平（瑞士梅特勒公司）。板蓝根颗粒浸膏由贵州星州药业股份有限公司提供，批号为20131001，20131002。（R，S）-告依春（批号111753-201304）对照品购自中国药品生物制品检定研究院，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.02%磷酸溶液（4.5：95.5）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：245nm；柱温：30℃；进样量：10μL。色谱图见图1，图2。
2.2 对照品溶液的制备 取（R，S）-告依春对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.12mg的溶液，即得。
2.3 提取方法试验 为了真实地反映出浸膏中的（R，S）-告依春的含量， 对提取方式和提取时间分别进行了考察。优化提取方式，最大限度地提取出浸膏中的（R，S）-告依春。
2.3.1 提取方式的选择 取批号为20131001的浸膏0.3g，2份，精密称定，精密加入水50mL，精密称定，分别置超声波提取仪提取30分钟，水浴上回流提取30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.2 提取时间的选择 取批号为20131001的浸膏0.3g，4份，精密称定，精密加入水50mL，精密称定，分别水浴上回流提取15、30、45、60分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果表明：提取时间大于30分钟后，（R，S）-告依春的含量增加不明显。因此，故供试品溶液的制备采用回流提取的时间为30分钟。
2.4 供试品溶液的制备 取本品0.3g，精密称定，精密加入水50ml，精密称定，超声处理（功率250w，频率25kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.5 系统适应性试验 取（R，S）-告依春对照品溶液、供试品溶液各20 μL进样， （R，S）-告依春保留时间为16.45 min，在供试品色谱中与（R，S）-告依春对照品色谱相应的位置上有色谱峰， 样品色谱图中（R，S）-告依春与其它杂峰能很的好分离，分离度大于1.5。理论塔板数按（R，S）-告依春峰计算应不低于5000。
2.6 线性关系考察 精密吸取（R，S）-告依春对照品溶液1、3、5、3、1mL分别置100mL、100 mL、100 mL、50mL、10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL， 记录峰面积。以（R，S）-告依春峰面积对（R，S）-告依春质量数（μg）进行线性回归计算，得线性回归方程为：Y =4697.1377X+16.1815， r=0.9997（n=6）。结果表明： （R，S）-告依春在0.02392 ～ 0.23916 μg的范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验 取（R，S）-告依春对照品溶液20 μL， 按“2.1” 项下的色谱条件， 分别测定6次， 每次记录色谱图峰面积。（R，S）-告依春的峰面积RSD为1.1%，结果说明精密度良好。
2.8 重复性试验 取本品 （批号为20131001），取约0.3g，6份， 按“2.4”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件分别测定，记录峰面积。测得（R，S）-告依春含量平均值为0.9482mg·g-1，RSD为2.3%。结果说明重现性良好。
2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液， 分别在0， 2， 6， 8，12小时分别进样20μL， 按“2.1”项下的色谱条件测定。（R，S）-告依春的峰面积RSD为0.8%。结果表明， 供试品溶液在12 小时之内稳定。
2.10 加样回收率试验 分别精密称取本品（批号为20131001）6份已测定含量的样品（含量为：0.9482mg·g-1）0.15g，精密加入（R，S）-告依春对照品溶液（浓度为0.1243mg·mL-1）1mL，按“2.4”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表3。
3 含量测定
按“2.4”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的含量，结果见表4。
4 讨论
近年来，板蓝根的含量测定指标一般为靛玉红、靛蓝和（R，S）-告依春。由于靛玉红、靛蓝为脂溶性成分，并且无抗病毒活性。（R，S）-告依春为水溶性成分，并有抗病毒活性。加之板蓝根颗粒浸膏为水提取后浓缩而得，故本文采用（R，S）-告依春为浸膏中的质控指标，以保证最终产品板蓝根颗粒的用药有效性。
提取条件的考察 对提取条件的考察主要从提取方式和提取时间两方面考察。提取方式的考察，结果加热回流提取的（R，S）-告依春含量与超声提取的（R，S）-告依春含量无明显差异。考虑实验操作的简便，采用超声提取。提取时间考察了15、30、45、60分钟，结果看出，提取15分钟的（R，S）-告依春含量远低于30分钟提取，而45、60分钟提取与30分钟提取（R，S）-告依春含量相差不大，因此最佳提取时间为30分钟。
该方法简单、灵敏、稳定、可靠，可用于板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的含量测定，为企业提供板蓝根颗粒内控指标。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[S] .北京：中国医药科技出版社， 2010：800
[2] 徐丽华，黄芳，陈婷，等。板蓝根中的抗病毒活性成分[J]。中国天然药物，2005，3（6）：359-360
【摘要】目的： 建立板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的HPLC含量测定方法。方法：色谱柱为Agilent C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.02%磷酸溶液（4.5：95.5），检测波长为245nm，柱温为30℃，流速为1.0mL·min- 1。结果： （R，S）-告依春在0.02392 ～ 0.23916 μg的范围内与峰面积值成良好的线性关系（ r=0.9997） ，平均加样回收率（n=6）为101.2%，RSD为3.2%。结论： 该方法简单、准确、专属性强，作为板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的含量测定方法，为板蓝根颗粒的生产提供内控指标。
【关键词】板蓝根颗粒浸膏；（R，S）-告依春；含量测定
板蓝根颗粒为板蓝根单方制剂。《中国药典》2010年版板蓝根颗粒功能主治为具有清热解毒，凉血利咽的功效。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者 [1] 。其制法为水提后浓缩，用60%乙醇醇沉后，取上清液浓缩至浸膏。与辅料混合制粒而成。有研究报道，（R，S）-告依春为板蓝根中的抗病毒活性成分[2]。为了控制本品浸膏的质量，以（R，S）-告依春的含量为考察指标，建立本品浸膏中（R，S）-告依春的含量方法，为板蓝根颗粒的的生产提供内控指标。
1 仪器和试药
戴安Ultimate 3000型高效液相色谱仪，Agilent C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm），AE200型十万分之一分析天平（瑞士梅特勒公司），XP26型百万分之一分析天平（瑞士梅特勒公司）。板蓝根颗粒浸膏由贵州星州药业股份有限公司提供，批号为20131001，20131002。（R，S）-告依春（批号111753-201304）对照品购自中国药品生物制品检定研究院，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.02%磷酸溶液（4.5：95.5）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：245nm；柱温：30℃；进样量：10μL。色谱图见图1，图2。
2.2 对照品溶液的制备 取（R，S）-告依春对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.12mg的溶液，即得。
2.3 提取方法试验 为了真实地反映出浸膏中的（R，S）-告依春的含量， 对提取方式和提取时间分别进行了考察。优化提取方式，最大限度地提取出浸膏中的（R，S）-告依春。
2.3.1 提取方式的选择 取批号为20131001的浸膏0.3g，2份，精密称定，精密加入水50mL，精密称定，分别置超声波提取仪提取30分钟，水浴上回流提取30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.2 提取时间的选择 取批号为20131001的浸膏0.3g，4份，精密称定，精密加入水50mL，精密称定，分别水浴上回流提取15、30、45、60分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果表明：提取时间大于30分钟后，（R，S）-告依春的含量增加不明显。因此，故供试品溶液的制备采用回流提取的时间为30分钟。
2.4 供试品溶液的制备 取本品0.3g，精密称定，精密加入水50ml，精密称定，超声处理（功率250w，频率25kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.5 系统适应性试验 取（R，S）-告依春对照品溶液、供试品溶液各20 μL进样， （R，S）-告依春保留时间为16.45 min，在供试品色谱中与（R，S）-告依春对照品色谱相应的位置上有色谱峰， 样品色谱图中（R，S）-告依春与其它杂峰能很的好分离，分离度大于1.5。理论塔板数按（R，S）-告依春峰计算应不低于5000。
2.6 线性关系考察 精密吸取（R，S）-告依春对照品溶液1、3、5、3、1mL分别置100mL、100 mL、100 mL、50mL、10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL， 记录峰面积。以（R，S）-告依春峰面积对（R，S）-告依春质量数（μg）进行线性回归计算，得线性回归方程为：Y =4697.1377X+16.1815， r=0.9997（n=6）。结果表明： （R，S）-告依春在0.02392 ～ 0.23916 μg的范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验 取（R，S）-告依春对照品溶液20 μL， 按“2.1” 项下的色谱条件， 分别测定6次， 每次记录色谱图峰面积。（R，S）-告依春的峰面积RSD为1.1%，结果说明精密度良好。
2.8 重复性试验 取本品 （批号为20131001），取约0.3g，6份， 按“2.4”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件分别测定，记录峰面积。测得（R，S）-告依春含量平均值为0.9482mg·g-1，RSD为2.3%。结果说明重现性良好。
2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液， 分别在0， 2， 6， 8，12小时分别进样20μL， 按“2.1”项下的色谱条件测定。（R，S）-告依春的峰面积RSD为0.8%。结果表明， 供试品溶液在12 小时之内稳定。
2.10 加样回收率试验 分别精密称取本品（批号为20131001）6份已测定含量的样品（含量为：0.9482mg·g-1）0.15g，精密加入（R，S）-告依春对照品溶液（浓度为0.1243mg·mL-1）1mL，按“2.4”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表3。
3 含量测定
按“2.4”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的含量，结果见表4。
4 讨论
近年来，板蓝根的含量测定指标一般为靛玉红、靛蓝和（R，S）-告依春。由于靛玉红、靛蓝为脂溶性成分，并且无抗病毒活性。（R，S）-告依春为水溶性成分，并有抗病毒活性。加之板蓝根颗粒浸膏为水提取后浓缩而得，故本文采用（R，S）-告依春为浸膏中的质控指标，以保证最终产品板蓝根颗粒的用药有效性。
提取条件的考察 对提取条件的考察主要从提取方式和提取时间两方面考察。提取方式的考察，结果加热回流提取的（R，S）-告依春含量与超声提取的（R，S）-告依春含量无明显差异。考虑实验操作的简便，采用超声提取。提取时间考察了15、30、45、60分钟，结果看出，提取15分钟的（R，S）-告依春含量远低于30分钟提取，而45、60分钟提取与30分钟提取（R，S）-告依春含量相差不大，因此最佳提取时间为30分钟。
该方法简单、灵敏、稳定、可靠，可用于板蓝根颗粒浸膏中（R，S）-告依春的含量测定，为企业提供板蓝根颗粒内控指标。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[S] .北京：中国医药科技出版社， 2010：800
[2] 徐丽华，黄芳，陈婷，等。板蓝根中的抗病毒活性成分[J]。中国天然药物，2005，3（6）：359-360