【摘 要】
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目的:建立一种环介导等温扩增测定法,以快速,可视化的检测丙型肝炎病毒(HCV).方法:通过比对分析,选择了高度保守的HCV5'UTR序列作为设计逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)引物
【机 构】
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南京红十字血液中心质量管理科(南京,210003)
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目的:建立一种环介导等温扩增测定法,以快速,可视化的检测丙型肝炎病毒(HCV).方法:通过比对分析,选择了高度保守的HCV5'UTR序列作为设计逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)引物的合适靶标.确定样品前处理方法,反应体系的最佳条件,进行方法学评价.HCVRT-LAMP分析产物以实时扩增曲线和显色反应呈现.结果:扩增反应在64℃下进行60 min,加入FD染料可以实现反应产物不开盖,肉眼可见.RT-LAMP的结果表明,检测HCV的灵敏度约为50拷贝(200 ag)?500拷贝(2 fg).HCV与HIV,HBV之间无交叉反应.结论:RT-LAMP测定法具有快速扩增,简单操作和可见检测而无污染的优势.它为评估HCV RT-LAMP在特殊环境和有限资源(如发展中国家的献血检查)中的可行性奠定了基础.
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