【摘 要】
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目的:检测程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)在肺纤维化模型中的表达水平及对细胞活力和肺纤维化指标的影响及其机制。方法:Western blot和RT-qPCR检测PDCD4、α-平滑肌肌动蛋白(α
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科
【基金项目】
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国家临床重点专科专项(卫办医政函[2012] 649 号), 重庆市应用开发计划项目(No.cstc2014yykfA110026).
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目的:检测程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)在肺纤维化模型中的表达水平及对细胞活力和肺纤维化指标的影响及其机制。方法:Western blot和RT-qPCR检测PDCD4、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白(COL-I)在人胚肺成纤维细胞系HFL-1组和HFL-1+TGF-β1组的表达水平。将质粒pEZ-M03-PDCD4和空质粒pEZ-M03转染进肌成纤维细胞(MB),应用Western blot检测PDCD4的蛋白表达水平;应用Western blot检测空白对照组、pEZ-M03-PDCD4组、pEZ-M03组和LY294002组PI3K/AKT信号通路相关分子p-AKT和AKT的蛋白水平及周期相关蛋白c-Myc和cyclin D1的表达情况; CCK-8法检测PDCD4对MB活力的影响;羟脯氨酸消化法检测HFL-1细胞和转染后MB上清液羟脯氨酸含量。Western blot检测小鼠模型组与对照组中肺组织PDCD4的表达水平。结果:与HFL-1组比较,HFL-1+TGF-β1组α-SMA和COL-I的mRNA及蛋白表达明显上调(P <0. 01),PDCD4mRNA表达无明显变化,PDCD4的蛋白表达明显下调(P <0. 01)。与空白对照组及pEZ-M03组比较,pEZ-M03-PDCD4组的PDCD4蛋白表达水平明显上调(P <0. 05),c-Myc和cyclin D1的蛋白表达都显著减少(P <0. 05),细胞活力明显受到抑制(P <0. 01),上清液中羟脯氨酸的含量显著减少(P <0. 05)。与空白对照组相比,pEZ-M03-PDCD4组及LY294002组中的p-AKT蛋白水平显著减少(P <0. 05),pEZ-M03组的差异无统计学显著性。在小鼠体内模型实验中,与对照组相比,模型组的PDCD4表达减少(P <0. 01)。结论:PDCD4在肺纤维化过程中低表达。过表达PDCD4可抑制MB活力,减少羟脯氨酸含量,抑制PI3K/AKT信号通路。
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