【摘 要】
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为鉴定抗除草剂转基因大豆新品种\'GE-J12,的外源基因插入拷贝数,以该转化体的外源插入目的基因G2-EPSPS和GAT的序列、3\'转化体特异性序列为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,并对引物探针特异性进行鉴定,同时以大豆内标基因Lectin为参照,建立微滴数字PCR拷贝数检测体系.特异性试验结果显示,只有以抗除草剂转基因大豆\'GE-J12\'基因组DNA为模板才有扩增信号.以单株转基因大豆\'GE-J12,基因组DNA为模板,进行外源目的基因G2-EPSPS和GAT
【机 构】
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天津市农业科学院生物技术研究所,天津300384;河北农业大学食品科技学院,河北保定071001
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为鉴定抗除草剂转基因大豆新品种\'GE-J12,的外源基因插入拷贝数,以该转化体的外源插入目的基因G2-EPSPS和GAT的序列、3\'转化体特异性序列为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,并对引物探针特异性进行鉴定,同时以大豆内标基因Lectin为参照,建立微滴数字PCR拷贝数检测体系.特异性试验结果显示,只有以抗除草剂转基因大豆\'GE-J12\'基因组DNA为模板才有扩增信号.以单株转基因大豆\'GE-J12,基因组DNA为模板,进行外源目的基因G2-EPSPS和GAT、3\'转化体特异性序列的微滴数字PCR检测,转基因大豆\'GE-J12\'的外源目的基因G2-EPSPS和GAT在基因组上的插入拷贝数均值分别为0.99和1.01.同时3\'转化体特异性序列的拷贝数均值为1.00,验证单株转基因大豆\'GE-J12\'为纯合子,因此鉴定该单株转基因大豆\'GE-J12\'的外源基因在大豆基因组上为单拷贝插入,同时与Southern blot方法进行比较,结果一致.
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