【摘 要】
：
目的 探讨利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术鉴别西洋参的方法.方法 针对西洋参的CYP450基因设计特异性引物,应用RT-LAMP(real time-LAMP)、琼脂糖凝胶电泳和可视化检测3种方法对LAMP检测方法进行优化,并对其灵敏性和特异性进行了评价.结果 LAMP反应体的最佳孵育时间为60 min,最佳反应温度为65℃,最适内外引物比为8∶1.反应体系的灵敏度达到0.5 ng·μL-1,特异性较好,能与近缘植物人参相
【机 构】
：
北华大学医学技术学院,吉林吉林132013;国家参茸产品质量监督检验中心,吉林延边132011;吉林省益盛汉参生物科技有限公司,吉林通化134200
论文部分内容阅读
目的 探讨利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术鉴别西洋参的方法.方法 针对西洋参的CYP450基因设计特异性引物,应用RT-LAMP(real time-LAMP)、琼脂糖凝胶电泳和可视化检测3种方法对LAMP检测方法进行优化,并对其灵敏性和特异性进行了评价.结果 LAMP反应体的最佳孵育时间为60 min,最佳反应温度为65℃,最适内外引物比为8∶1.反应体系的灵敏度达到0.5 ng·μL-1,特异性较好,能与近缘植物人参相区分开.将人参掺入西洋参模拟市场掺假行为,其检出率达到20％.对市售22份西洋参产品进行检测,其阳性率达到81％.结论 建立了一种快速、简便、特异、灵敏的西洋参LAMP检测方法,为人参和西洋参的快速检测和规范中药市场提供有力工具.
其他文献
目的 研究典型生态环境对珠芽蓼生物学特性及药材品质的影响,为高品质珠芽蓼药材生产模式及资源可持续利用与开发奠定基础.方法 通过样方调查对3个海拔、2个坡向样地的生态环境特征、种群结构,植物多样性以及珠芽蓼的生物学特征进行测定与统计分析;分别采用烘干法与灼烧失量法测定土壤水分含量与土壤有机质含量.对珠芽蓼性状指标进行测量并采用高效液相色谱法对其主要药效成分没食子酸和绿原酸的含量进行测定.结果 珠芽蓼群落物种丰富度呈现低海拔＞高海拔,阴坡向＞阳坡向的趋势.珠芽蓼在群落中的优势度表现为阴坡向＞阳坡向,其中阴坡向
目的 建立彝族药姜味草的高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱分析方法,结合化学模式识别,对其质量进行分析,并测定其中4种成分的含量.方法 采用Agilent-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,4 μm),以乙腈-0.2％磷酸水为流动相,梯度洗脱,以迷迭香酸为参照,建立15批不同来源样品的HPLC特征图谱,结合相似度评价、聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等方法,进行药材质量评价,并测定4种成分的含量.结果 建立了 15批彝族药姜味草HPLC指纹图谱
目的 考察葛根素在自制眼用线性微透析探针上的体内外回收率与灌流速度、药物浓度的关系,以期为葛根素在兔眼内的药动学研究提供依据.方法 采用HPLC测定葛根素浓度,通过体外正向法、反向法与体内反向法研究不同灌流速度和药物浓度对微透析探针回收率的影响.结果 在所研究的药物浓度和灌流速度的范围内,葛根素在微透析探针上的回收率与药物浓度无关,与灌流速度成反比;体外正、反向回收率之间在灌流速度为1.0、2.0和3.0 μL·min-时均无显著性差异(P＞0.05);体内反向回收率显著低于体外正、反向回收率(P＜0.0
目的 研究药材绵马贯众中间苯三酚类化学成分.方法 采用大孔吸附树脂富集(体积分数为10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和95％乙醇等依次洗脱),以及制备C18柱色谱(色谱柱:49 mm×460 mm,分别用体积分数10％甲醇、20％甲醇水、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇和100％甲醇依次洗脱)、凝胶柱色谱(甲醇洗脱)、以及制备高效液相色谱[乙腈-0.1％三氟乙酸(3∶7)洗脱]等多种色谱分离手段进行分离纯化,用有机波谱手段鉴定分离得到的化合物结构.结果 从绵马贯众的体积分数95％乙醇提取物中
目的 运用网络药理学和细胞生物学验证探讨黄芪治疗糖尿病肾病的分子作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选出黄芪有效成分;利用Drugbank数据库、GeneCards和OMIM数据库筛选黄芪有效成分和糖尿病肾病的相关靶点;应用String数据库绘制PPI网络;通过Cytoscape软件绘制黄芪-成分-靶点-疾病网络;借助DAVID数据库对靶点进行GO和KEGG通路分析;利用KEGG数据库构建黄芪治疗糖尿病肾病的通路图;细胞生物学验证分析黄芪中的有效成分对糖尿病肾病的保护作用.结果 筛选得
目的 基于DNA条形码技术建立一种可以实现对大黄麈虫丸中水蛭成分真伪品鉴定的方法.方法 首先以CO Ⅰ通用引物对大黄座虫丸中成药DNA进行一轮聚合酶链式反应(PCR)扩增,随后采用自行设计和筛选出的水蛭通用引物对一轮PCR反应液进行二轮PCR扩增,联合Sanger测序技术,对二轮PCR扩增产物测序,最后对测序结果峰图采用seqman软件进行序列拼接,将拼接后的DNA序列在NCBI数据库中用BLAST在线比对软件进行比对判定,进而鉴定水蛭成分真伪.结果 本实验建立的巢氏PCR方法联合Sanger测序技术通过
蛋白降解嵌合体(proteolysis targeting chimeras,PROTACs)是一类具有募集靶蛋白并诱导其泛素化降解的双功能分子.相较于传统小分子抑制剂,PROTACs这种直接降解目标蛋白的作用模式具有高选择性,高效性,更重要的是该技术可以靶向不可成药蛋白,解决小分子药物耐药性问题等优势.E3泛素连接酶参与泛素蛋白酶体系统降解途径,决定PROTACs分子靶向E3泛素连接酶部分的特异性识别,庞大的E3家族对PROTACs技术的发展至关重要.第二代小分子类PROTACs相较于第一代多肽类PRO
目的 基于聚合酶链式反应(PCR)技术,利用核酸扩增产物,建立一种可以快速鉴定金钱白花蛇中药材真伪的可视化试纸条检测方法.方法 提取金钱白花蛇、赤链蛇及市售样本的基因;根据mtDNA Cytb序列进行对比分析,设计1对特异性鉴别引物,进行修饰物标记;建立鉴别PCR反应体系,使用核酸扩增产物,利用可视化试纸条对市售样本进行真伪鉴定.结果 鉴别引物可将正品金钱白花蛇中药材扩增出500～600 bp之间的特异性条带,而伪混品则不出现相应的特异性条带;可视化试纸条对市售样本进行检测,鉴别效果良好,灵敏度高,可准确
目的 基于入血成分和网络药理学研究策略,探讨连夏消痞颗粒治疗功能性消化不良的潜在药效物质基础.方法 采用超高效液相联用四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)结合Simca-P软件对连夏消痞颗粒大鼠给药后血浆及尿液中原型成分进行定性解析.采用TCMSP、OMIM等在线数据库搜集化合物及疾病靶点,取交集后构建蛋白互作网络,筛选核心靶点并进行通路富集.采用Cytoscape软件构建活性成分-靶点-通路网络图;采用分子对接,对排名靠前的化学成分与靶点的相互关系进行验证,为体内药效物质基础研究提供参考.结
目的 建立头孢噻吩杂质A的首批国家标准物质,为2020年版《中国药典》头孢噻吩的检测提供必需的标准物质.方法 首先,采用红外、质谱和核磁共振的方法时头孢噻吩杂质A进行结构确证.其次,采用2020年版《中国药典》头孢噻吩有关物质检查项下的方法,测定头孢噻吩杂质A的纯度.然后,测定头孢噻吩杂质A的干燥失重和炽灼残渣.最后,采用质量平衡法对首批头孢噻吩杂质A国家标准物质进行赋值,同时采用核磁定量法测定其含量,与质量平衡法测得的结果相互验证.结果 头孢噻吩杂质A与2020年版《中国药典》规定的结构相同,质量平衡法