丹参素对银屑病样细胞Yes相关蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响

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目的

研究丹参素对M5刺激的HaCaT细胞(银屑病样细胞模型)增殖、凋亡的影响及与Yes相关蛋白(YAP)的关系。

方法

采用M5(含10 μg/L的IL-1α、IL-17、IL-22、TNF-α、Oncostatin M)作用于HaCaT细胞48 h,制作银屑病样细胞模型,同时分别加入0(对照组)、0.125、0.25、0.5 mmol/L丹参素刺激细胞,以未做处理的HaCaT细胞为空白对照组。实时定量PCR及Western印迹检测各组细胞YAP的表达;MTT法检测丹参素刺激细胞24、48、72 h时各组细胞的增殖活性;流式细胞仪检测丹参素对各组细胞周期及凋亡的影响,Western印迹检测各组细胞周期相关蛋白(cyclin A、cyclin B1、cyclin D、cyclin E)及凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、Bcl-2、BAX、p53、p21)的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较用LSD-t检验。

结果

空白对照组与0(对照组)、0.125、0.25、0.5 mmol/L丹参素组细胞YAP mRNA、蛋白的相对表达水平及培养24、48、72 h时的增殖活力差异均有统计学意义(P < 0.001),0.125、0.25、0.5 mmol/L丹参素组YAP mRNA(1.76 ± 0.04、1.54 ± 0.05、1.33 ± 0.05)、YAP蛋白的相对表达水平(1.78 ± 0.06、1.49 ± 0.32、1.27 ± 0.04)及培养48 h时的细胞增殖活力(1.66 ± 0.04、1.52 ± 0.02、1.34 ± 0.04)均低于对照组(mRNA:2.04 ± 0.04,蛋白:2.10 ± 0.06,活力:1.82 ± 0.03,均P < 0.05)。流式细胞仪检测显示,5组细胞G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例及凋亡率差异均有统计学意义(P < 0.001),0.125、0.25、0.5 mmol/L丹参素组细胞G0/G1期、G2/M期细胞比例高于对照组,S期细胞比例低于对照组(均P < 0.05),0.25、0.5 mmol/L丹参素组细胞凋亡率高于对照组(均P < 0.05)。Western印迹显示,5组的细胞周期相关蛋白及凋亡相关蛋白相对表达差异均有统计学意义。

结论

丹参素可能通过抑制YAP的表达而抑制银屑病样细胞的增殖与促进其凋亡。

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