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对一株胞外胆固醇氧化酶高产菌COX4-8进行了三相分离,结果表明:最优分离条件为:硫酸铵-异丙醇沉淀,硫酸铵饱和度为70%,异丙醇与发酵上清液的体积比为0.8∶1时,pH值为9,在20℃下静置30min,12 000r/min离心10min,纯化倍数4.5倍,回收率高达95%.酶动力学方法检测胆固醇氧化酶测定血清总胆固醇含量,其线性回归方程为y=0.006 4x+0.002 7,R2=0.965 4,线性范围0~7.16mmol/L.结果表明了该酶具有作为临床诊断试剂的潜力,并为临床上利用酶动力学方法测定血清总胆固醇含量奠定了实验基础.