【摘 要】
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制备抗人肝细胞生长因子激活物抑制因子 (HAI 1 )单克隆抗体 ,为对HAI 1进行进一步的研究打下基础。将人HAI 1cDNA分段克隆 ,构建GST HAI 1融合蛋白原核表达载体 ,转化大肠杆
【机 构】
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浙江大学医学院附属第二医院,上海市第一人民医院
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制备抗人肝细胞生长因子激活物抑制因子 (HAI 1 )单克隆抗体 ,为对HAI 1进行进一步的研究打下基础。将人HAI 1cDNA分段克隆 ,构建GST HAI 1融合蛋白原核表达载体 ,转化大肠杆菌后加IPTG诱导融合蛋白表达 ,经制备型SDS PAGE法分离表达的GST HAI 1融合蛋白 ,通过割胶、电洗脱回收融合蛋白 ,并以此为抗原免疫BALB c小鼠 ,应用细胞融合技术制备产生抗人HAI 1单克隆抗体的杂交瘤 ,以ELISA、Westernblot和免疫组织化学染色进行鉴定。最终获得抗人HAI 1单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC6 ,产生的单克隆抗体可特异性地与表达的GST HAI 1融合蛋白反应 ,并可识别大肠组织中的膜型及脱落型HAI 1蛋白。该单克隆抗体的制备成功 ,为深入研究HAI 1的功能提供了有力工具
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