【摘 要】
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目的 探讨转录因子激活蛋白2E(TFAP2E)对人肝癌细胞系HepG2和HCC-LM3细胞增殖和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 在人肝癌细胞系HepG2和HCC-LM3中使用慢病毒包装方法
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,蛋白质组学国家重点实验室,国家蛋白质科学中心(北京),北京 100850
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目的 探讨转录因子激活蛋白2E(TFAP2E)对人肝癌细胞系HepG2和HCC-LM3细胞增殖和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 在人肝癌细胞系HepG2和HCC-LM3中使用慢病毒包装方法转染入TFAP2E过表达的重组质粒,筛选得到稳定过表达TFAP2E的肝癌细胞系.转染小干扰RNA (siRNA)抑制人肝癌细胞系HepG2和HCC-LM3中TFAP2E的表达.Western印迹法在肝癌细胞系中检测TFAP2E蛋白的表达水平,以验证TFAP2E的过表达和敲低效果.Cell Counting Kit-8(CCK-8)法评价TFAP2E对肝癌细胞系增殖能力的影响.Tran-swell实验检测TFAP2E对肝癌细胞系迁移能力的影响.NetworkAnalyst方法鉴定TFAP2E高、低表达组间的差异表达基因;基于上述的显著差异表达基因,利用Enrichr软件进行通路富集分析,以揭示TFAP2E在肝癌细胞中的作用机制.采用Log-rank检验比较TFAP2E的表达水平对肝癌患者生存期的影响.结果 过表达TFAP2E可显著促进HepG2和HCC-LM3细胞的增殖和迁移能力,而敲低TFAP2E可显著抑制HepG2和HCC-LM3细胞的增殖和迁移能力.生物信息学分析提示TFAP2E可能参与TGF-β信号通路的调控.随后的实验证实,在HepG2细胞系中过表达TFAP2E可显著上调SMAD2的磷酸化水平,而敲低TFAP2E则显著下调SMAD2的磷酸化水平.临床相关性分析显示,TFAP2E在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,且TFAP2E的高表达与肝癌患者的不良预后显著相关.结论 TFAP2E可能通过促进TGF-β信号通路的激活,促进肝癌细胞的增殖和迁移,从而发挥癌基因的功能.
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