梨花药愈伤组织诱导和悬浮培养体系的建立及应用

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【目的】悬浮细胞培养是植物生物技术的重要手段之一,为了建立梨悬浮细胞体系,并利用悬浮细胞体系获得高质量悬浮细胞,进行遗传转化和原生质体的分离。【方法】本文以‘新梨7号’花药为试材,诱导获得梨花药愈伤组织,研究了细胞悬浮系建立和影响悬浮细胞增殖的主要因子。【结果】结果表明:花药在1/2 MS + 1.0 mg·L-1 2,4-D + 0.4 mg·L-1 NAA + 30 g·L-1蔗糖 + 7 g·L-1琼脂(pH值为5.8~6.0)诱导的愈伤组织,经4~5次继代得到了黄白色、颗粒状,状态相对较好的愈伤组织;将愈伤组织接种于液体培养基中,于28℃,200 r·min-1的黑暗条件下悬浮振荡培养,经4~5次悬浮继代培养建立了悬浮细胞系,适宜的启动和增殖培养基为:MS + 1.5 mg·L-12,4-D + 1.0 mg·L-1 6-BA + 30 g·L-1蔗糖,细胞生长曲线呈“S”型,活细胞率达81.98%,近圆细胞率达83.66%,可作为遗传转化的受体,转化率为20.00%。也可直接用于原生质体的分离,原生质体产量达3.67×106 个·mL-1,活力可达92.00%。【结论】建立了梨悬浮细胞培养体系,利用所建体系获得了高质量的悬浮细胞,可直接用于遗传转化和原生质体的分离。
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