【摘 要】
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目的 探究过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞（BMMSCs）复合胶原海绵支架修复大鼠股骨缺损的效果。方法 分离培养BMMSCs并采用流式细胞术鉴定细胞表型。使用过表达miR-378a慢病毒及阴性空载慢病毒转染BMMSCs，将转染细胞分为3组：过表达miR-378a转染BMMSCs组（LV-miR-378a组）、阴性对照慢病毒转染BMMSCs组（LV-miR-NC组）、未转染BMMSCs组（
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔修复种植科
【基金项目】
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新疆医科大学研究生创新创业项目（CXCY2022001）； 新疆维吾尔自治区自然科学基金计划青年项目（2021D01C337）；
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目的 探究过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞（BMMSCs）复合胶原海绵支架修复大鼠股骨缺损的效果。方法 分离培养BMMSCs并采用流式细胞术鉴定细胞表型。使用过表达miR-378a慢病毒及阴性空载慢病毒转染BMMSCs，将转染细胞分为3组：过表达miR-378a转染BMMSCs组（LV-miR-378a组）、阴性对照慢病毒转染BMMSCs组（LV-miR-NC组）、未转染BMMSCs组（对照组），并采用流式细胞术检测转染效率；制备转染细胞与胶原蛋白海绵（collagen sponge，CS）支架的复合物，使用扫描电镜观察细胞与支架的相容性。建立SD大鼠股骨缺损回植模型，将15只SD大鼠随机分为3组（n=5）：LV-miR-378a+CS组（植入过表达miR-378a慢病毒复合CS支架）、LV-miR-NC+CS组（植入阴性空载慢病毒转染的BMMSCs复合CS支架）、CS组（只植入CS支架）。术后第8周，SD大鼠使用CO2吸入法处死，取手术侧股骨样本进行大体观察、微型CT扫描重建，定量分析骨密度（bone mineral density，BMD）及骨体积分数（bone volume/total volume，BV/TV），并采用HE、Masson及骨桥蛋白（OPN）免疫组化染色观察骨修复情况。结果 流式细胞术检测BMMSCs细胞表型结果显示，细胞表面抗原CD44阳性表达率95.5%，CD29阳性表达率94.7%，而CD45阴性表达率0.8%，CD34阴性表达率0.7%。流式细胞术检测各组转染效率结果显示，与对照组比较，LV-miR-378a组和LV-miR-NC组转染效率明显增高（P＜0.05），而LV-miR-378a组与LV-miR-NC组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。扫描电镜结果显示，CS支架材料具有良好的三维空洞结构，两组细胞与CS支架共培养7 d后，LV-miR-378a组较LV-miR-NC组细胞在支架材料表面铺展区域更大，细胞呈团簇状生长，伸出的伪足更多。大体观察结果显示，术后8周，LV-miR-378a+CS组骨缺损区修复较为完全，LV-miR-NC+CS组及CS组骨缺损中心均可观察到未完全矿化的新生骨质，且CS组仍可见缺损区大致轮廓。微型CT三维重建及定量分析结果显示，术后8周，LV-miR-378a+CS组骨缺损区修复效果较其余两组更好，新骨沉积量较多，BMD及BV/TV值均明显高于其余两组（P＜0.05）。LV-miR-NC+CS组及CS组缺损区均未完全修复，且CS组新骨沉积量较少，密度不均一。HE、Masson染色结果显示，术后8周，LV-miR-378a+CS组支架材料完全降解，可见较多成熟骨小梁，新生骨与宿主骨交界区连续性较好，骨小梁彼此连接且形态规则；LV-miR-NC+CS组成熟骨小梁相对较少，新生骨与宿主骨交界区未完全相连；CS组支架材料未完全降解，处于改建重塑中的骨小梁仍较多且骨小梁形态不规则。免疫组化染色结果显示，术后8周可见LV-miR-378a+CS组骨桥蛋白表达率明显低于其余两组（P＜0.05），且LV-miR-NC+CS组骨桥蛋白表达率低于CS组（P＜0.05）。结论 过表达miR-378a修饰BMMSCs复合CS支架可促进新骨形成。
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