【摘 要】
：
目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类肝癌细胞HepG2中的甲状腺激素受体相关蛋白3(THRAP3)基因,构建THRAP3基因敲除细胞系.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异
【机 构】
：
安徽医科大学解放军307临床学院,合肥 230032;解放军总医院第五医学中心内分泌科,北京 100071;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院生物工程
论文部分内容阅读
目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类肝癌细胞HepG2中的甲状腺激素受体相关蛋白3(THRAP3)基因,构建THRAP3基因敲除细胞系.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性靶向THRAP3基因第3个外显子相关序列的多条小向导RNA,通过T7核酸内切酶筛选出切割效率最高的载体,构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒.测序鉴定后,将重组质粒转染至HepG2细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选细胞株,挑取单克隆,再用PCR、测序等方法鉴定细胞基因型,免疫印迹方法鉴定细胞THRAP3敲除效果.使用高通量测序的方法进行基因表达分析.用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响,CCK-8试剂盒检测细胞增殖.结果 成功构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒,筛选出特异性敲除THRAP3基因的细胞系,验证了THRAP3敲除对细胞周期以及细胞增殖的影响.结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建并获得了THRAP3基因敲除细胞系并初步探究了THRAP3基因功能.
其他文献
先天性心脏病易导致出生缺陷,严重影响新生儿的身体健康。目前,先天性心脏病的具体病因及发病机制仍不明确。高原地区有其独特的环境特点,导致高海拔生理反应的最重要因素是低气压和相应的低氧。高原低压低氧特殊环境下的先天性心脏病发病率较平原地区显著增高。本文对高原低氧与先天性心脏病关系的研究进展进行综述。
中国为原发性肝癌高发地区,大部分肝癌患者首诊时已为晚期,具有治疗效果欠佳、预后差、5年生存率低等特点。肝癌发病机制复杂,针对肝癌防治的新靶点亟待探索。中性粒细胞在机体固有免疫中发挥防御作用,而研究发现中性粒细胞在肝癌肿瘤微环境中也扮演了重要角色,参与了肝癌发生、发展和转移等多个环节。本研究对肿瘤相关中性粒细胞在肝癌肿瘤微环境中相关作用的研究进展进行分析,探索肝癌的潜在治疗靶点,并为肝癌的防治策略提供新的思路。
目的观察健脾化瘀方对Ⅲ~Ⅳ期胃癌血液高凝状态患者凝血指标、组织因子(TF)、炎症指标、血小板聚集试验的影响。方法将50例患者随机分为试验组与对照组,每组25例。试验组接受健脾化瘀方联合肿瘤基础治疗,对照组仅接受肿瘤基础治疗,治疗时间(42±2)d。在入组第1天、第(21±2)天、第(42±2)天对受试者进行访视并统计分析结果。结果①治疗2个周期后,试验组较对照组D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)降低,凝血酶时间(TT)延长,差异有统计学意义(P<0.01)。②与治疗前比较,试验组治疗后组织因
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)具有强传染性、人群普遍易感性、高病死率等特点;而急性心肌梗死具有发病迅速、最佳救治窗口期短、病情危重等特点,其救治关键在于选择最佳策略以最大限度地提高再灌注效率。目前疫情防控形势严峻,对急性心肌梗死行急诊腔内介入治疗等临床工作也提出了新的要求。为规范救治流程,本研究对心血管医务人员的岗前培训,首诊COVID-19筛查,急性心肌梗死患者病情评估流程,以及急性心肌梗死行急诊介入手术的适应证、手术管理策略等进行了探讨。
目的观察黄柏红花散对抗肿瘤药物相关静脉炎的预防效果。方法将270例使用抗肿瘤药物患者随机分为3组,A组采用黄柏红花散外敷,B组采用尤卓尔外涂,C组采用尤卓尔涂抹联合黄柏红花散外敷,每组90例。观察3组静脉炎发生率及疼痛发生情况。结果C组静脉炎发生率与疼痛发生率与A组和B组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尤卓尔联合黄柏红花散可有效预防抗肿瘤药物相关静脉炎的发生,且联合用药效果更佳。
目的 设计发明一种新型骨骼击打装置,并优化髓内针固定手术方案,建立用于骨折愈合机制研究及骨折治疗药物评价的标准闭合型小鼠股骨骨折模型.方法 自主设计针对小鼠的骨折击
目的观察下胫腓联合螺钉内固定对急性踝关节骨折伴三角韧带损伤患者术后关节功能恢复的影响。方法将138例急性踝关节骨折伴三角韧带损伤患者随机分为对照组(n=66)和观察组(n=72),对照组采取三角韧带修复,观察组采取下胫腓联合螺钉内固定术治疗。比较2组患者手术时间和术后骨折愈合时间、术后并发症、末次随访时踝关节功能以及影像学测量指标水平。结果2组患者性别、年龄、受伤至就诊时间以及受伤类型等临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组患者手术时间以及术后骨折愈合时间比较,差异无统计学意义(P&
目的分析CT引导下经皮肺穿刺活检(CT-PTNB)在肺部病变中的诊断意义及并发症发生情况。方法选取行CT-PTNB的51例患者为研究对象。记录和分析51例患者病理诊断率及术后并发症发生率。结果51例患者中,一次活检确诊48例,二次活检确诊2例,总确诊率为98.0%(50/51)。5例患者术后出现气胸,气胸的发生与患侧肺气肿、病灶最大径相关,差异有统计学意义(P<0.05)。12例患者术后出现肺野局部出血,其中2例患者术中出现少量咯血。出血的发生与高血压、病灶最大径、病灶深度相关,差异有统计学意义(P
目的 建立镇痛药S-1903中有关物质的高效液相色谱法(HPLC),并考察S-1903原料药在不同影响因素下的稳定性.方法 采用CAPCELL PAK C18 MGⅡS5色谱柱,流动相为0.18％的冰醋酸溶液(
目的 分析拇指末节离断再植存活率的相关影响因素.方法 回顾性分析2014-2020年在本院行断指再植的106例单侧拇指末节完全离断患者的临床资料.术后6个月随访时,评估患者再植拇