模板制备方法对单细胞PCR检测DMD基因的影响

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旨在探讨模板制备方法对单细胞PCR准确性的影响,采用KOH/DTT和液氮冻融煮沸两种不同方法裂解单个淋巴细胞,行DMD基因外显子17、19、44、45、48五重巢式PCR。用KOH/DTT法裂解的细胞扩增成功率为98%(147/150),失败率为2%(3/150);用液氮冻融煮沸法裂解的细胞扩增成功率为78%(117/150),失败率为22%(33/150),差异有显著性(χ2=28.4,P<0.01)。结果表明单细胞PCR模板制备与PCR扩增失败有密切关系,选用合适的细胞裂解方法可提高单细胞PCR
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