研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导位点特异性DNA去甲基化促进人表皮角质细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。
方法用10 ng/ml的TNF-α或2.5 μmol/L的5-氮杂-2′-脱氧胞苷(DAC)联合300 nmol/L的曲古菌素A(TSA)处理人表皮角质细胞株HaCaT细胞，采用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测各组细胞MMP9 mRNA水平，采用蛋白质印迹(Western Blot)及酶联免疫吸附法(ELISA)检测MMP9蛋白的表达水平。应用亚硫酸氢钠修饰后测序法(BSP)及甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法(Ms-HRM)检测TNF-α干预细胞后MMP9启动子区DNA甲基化改变差异最大的CpG位点。构建不同位点甲基化的MMP9启动子-荧光素酶报告基因重组质粒，检测特异性位点的DNA甲基化状态改变对MMP9启动子转录活性的影响。
结果各培养时间点，TNF-α干预组均较相应PBS对照组HaCaT细胞的MMP9表达量升高，且差异均有统计学意义(P<0.05)；经实时RT-PCR、蛋白质印迹和ELISA三种方法分别检测到的MMP9 mRNA和蛋白表达量随干预时间的变化趋势一致，均为先升高后下降。TNF-α干预后MMP9启动子区的10个CpG位点均发生不同程度的DNA去甲基化改变，其中－36 bp位点改变的差异有统计学意义(P<0.05)。－36 bp位点去甲基化后，MMP9转录活性明显提高。TNF-α干预后MMP9启动子区的10个CpG位点均发生不同程度的DNA去甲基化改变，其中－36 bp位点改变的差异有统计学意义(P<0.05)。－36 bp位点去甲基化后，MMP9转录活性明显提高。
结论TNF-α通过诱导HaCaT细胞MMP9基因启动子－36 bp位点DNA去甲基化上调MMP9表达。