【摘 要】
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[目的]通过体内外实验探究野马追内酯O （eupalinolide O,EO）对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制。[方法]采用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度，以确定EO浓度。将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5μmol·L-1组、EO 10μmol·L-1组，后两组以EO处理24 h，采用乳酸脱氢酶
【基金项目】
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浙江省自然科学基金项目（LGF20H280002）； 浙江中医药大学校级科研基金项目（2021ZZ04）～～；
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[目的]通过体内外实验探究野马追内酯O （eupalinolide O,EO）对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制。[方法]采用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度，以确定EO浓度。将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5μmol·L-1组、EO 10μmol·L-1组，后两组以EO处理24 h，采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测细胞毒性；流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。24只裸鼠通过乳腺脂肪垫注射BT-20细胞，建立乳腺癌模型，并随机分为对照组、阿霉素组(7 mg·kg-1),EO低剂量组(15 mg·kg-1)和EO高剂量组(30 mg·kg-1)，每组6只。除对照组外，各组裸鼠连续腹腔注射对应药物治疗21 d，期间测量体表肿瘤体积；结束后称取肿瘤质量，并采用免疫组化染色检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和Ki-67表达。采用免疫印迹法检测细胞和裸鼠肿瘤组织中B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2关联X （Bcl-2 associated X protein,Bax）、聚ADP核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase,PARP）、活化的半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved caspase-3）和活化的半胱氨酸蛋白酶-9（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9,cleaved caspase-9）蛋白表达。[结果] EO对BT-20细胞的抑制作用具有剂量-时间依赖性。与空白对照组比较，EO 5、10μmol·L-1组细胞毒性和凋亡率增加（P＜0.05,P＜0.01），且EO 10μmol·L-1组的细胞周期明显阻滞于G2/M期（P＜0.01）。与对照组比较，阿霉素组、EO低剂量组、EO高剂量组的裸鼠肿瘤质量显著降低（P＜0.01,P＜0.05），肿瘤组织内PCNA和Ki-67抗原表达显著降低（P＜0.01），肿瘤体积随治疗进展显著缩小（P＜0.01,P＜0.05）。与空白对照组比较，各组细胞的Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.01,P＜0.05）,Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高（P＜0.01,P＜0.05）；与对照组裸鼠比较，各给药组的Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.01,P＜0.05）,Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高（P＜0.01,P＜0.05）。[结论] EO在体内外抑制BT-20细胞增殖并诱导细胞凋亡，作用机制可能与其抑制Bcl-2蛋白表达，促进Bax、PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达有关。
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