【摘 要】
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目的 观察上调钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制蛋白(CaMKⅡN)基因表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖的影响及机制.方法 以白血病细胞系HL-60细胞为研究对象,采用Lipofectamine 2000脂质体法将CaMKⅡN基因真核表达载体pcDNA3.1/CaMKⅡN和空载体pcDNA3.1/myc-His(-)B分别转染细胞;Western blot法检测转染后的HL-60细
【机 构】
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200072上海,同济大学附属第十人民医院血液科,200072上海,同济大学附属第十人民医院血液科,200072上海,同济大学附属第十人民医院血液科,200072上海,同济大学附属第十人民医院血液科,
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目的 观察上调钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制蛋白(CaMKⅡN)基因表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖的影响及机制.方法 以白血病细胞系HL-60细胞为研究对象,采用Lipofectamine 2000脂质体法将CaMKⅡN基因真核表达载体pcDNA3.1/CaMKⅡN和空载体pcDNA3.1/myc-His(-)B分别转染细胞;Western blot法检测转染后的HL-60细胞CaMKⅡN基因表达;MTT法检测转染CaMKⅡIN基因的细胞增殖情况;半固体培养法分析转基因HL-60细胞集落形成情况;Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期分布.结果 人CaMKⅡN基因稳定转染HL-60细胞.过表达CaMKⅡN基因的HL-60细胞与空载体转染组及空白对照组相比,增殖受抑[(0.44±0.03)对(0.94±0.05)和(0.94±0.04),P＜0.01],细胞集落形成能力减低[(21.00±3.05)/500细胞对(111.00±4.58)/500细胞和(119.00±6.09)/500细胞,P＜0.01],转染72 h细胞凋亡率明显增高[(22.49±2.15)％对(7.17±0.72)％和(6.40±0.55)％,P＜0.01].过表达CaMKⅡN的HL-60细胞阻滞于G0/G1期[(82.97±2.90)％],明显高于空转组[(40.53+2.38)％]和空白对照组[(41.63+2.27)％](P＜0.05);转染CaMKⅡN基因的HL-60细胞Bcl-2表达水平明显降低.结论 上调人CaMKⅡN基因表达可有效抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡。
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