【摘 要】
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目的 建立冻干人用狂犬病疫苗原液纯度的体积分子排阻高效液相色谱（size exclusion column-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC）检测方法，并进行验证。方法 采用TSK-gel G6000PWXL色谱柱（7.8 mm×30 cm,13μm）进行测定，流动相为：0.1 mol/L PB缓冲液（pH 7.8）；流速为：0.5 m
【基金项目】
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沈阳市科技计划项目（F12-144-9-00）；
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目的 建立冻干人用狂犬病疫苗原液纯度的体积分子排阻高效液相色谱（size exclusion column-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC）检测方法，并进行验证。方法 采用TSK-gel G6000PWXL色谱柱（7.8 mm×30 cm,13μm）进行测定，流动相为：0.1 mol/L PB缓冲液（pH 7.8）；流速为：0.5 mL/min；检测波长为：280 nm；进样量为：20μL；柱温为：30℃。验证方法的系统适用性、专属性、精密性、耐用性，并确定检测限和定量限。采用建立的方法检测3批冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）原液及1批冻干人用狂犬病疫苗（人二倍体细胞）原液的纯度。结果 参比品与两种基质制备的冻干人用狂犬病疫苗原液目的蛋白色谱峰的分离度均＞ 1.5，峰拖尾因子均＜1.5；空白溶剂在目的蛋白出峰位置无吸收峰，不干扰测定；精密性验证中的保留时间和峰面积RSD均＜2.0%；定量限为10μg/mL，检测限为4μg/mL；参比品在278、280、282 nm 3种不同检测波长下连续进样3次，保留时间和峰面积RSD均＜2.0%。4批冻干人用狂犬病疫苗原液的纯度均＞ 97%。结论 建立的冻干人用狂犬病疫苗原液纯度SECHPLC检测方法具有良好的专属性、精密性及耐用性，为人用狂犬病疫苗的质量控制提供了可靠方法。
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