【摘 要】
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目的观察RNA干扰沉默黏蛋白1(MUC1)表达，食管癌细胞株Eca109在顺铂作用下的增殖差异，探讨MUC1表达与肿瘤顺铂耐药性的关系。方法设计靶向MUC1基因的慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA(siRNA)，并以感染复数(MOI)＝100转染人食管癌细胞株Eca109，用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)表达，用Western blot方法检测细胞内MUC1蛋白含量，验证siRNA
【机 构】
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250021 济南，山东大学附属省立医院胸外科,273399 临沂，山东省临沂市平邑县人民医院胸外科,250021 济南，山东大学附属省立医院胸外科,250021 济南，山东大学附属省立医院胸外科,2
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目的观察RNA干扰沉默黏蛋白1(MUC1)表达，食管癌细胞株Eca109在顺铂作用下的增殖差异，探讨MUC1表达与肿瘤顺铂耐药性的关系。
方法设计靶向MUC1基因的慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA(siRNA)，并以感染复数(MOI)＝100转染人食管癌细胞株Eca109，用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)表达，用Western blot方法检测细胞内MUC1蛋白含量，验证siRNA对MUC1基因抑制作用。设置浓度梯度0、5、15、30、45、60 μmol/L，分别作用0、12、24、48 h，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞抑制率，计算顺铂半数抑制浓度(IC50)。用Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)的表达，验证凋亡通路激活。
结果与对照组比较，转染了重组慢病毒颗粒pGC-LV-MUC1 siRNA的Eca109细胞(实验组)内MUC1蛋白水平(0.566±0.202比1.252±0.323，t＝3.119，P＝0.036)；顺铂作用12 h实验组IC50(μmol/L)(66.860±4.749比30.203±0.341，t＝13.335，P＝0.000)明显下降；顺铂作用24 h实验组细胞IC50(μmol/L)明显下降(13.710±0.617比33.680±1.737，t＝18.759，P＝0.000)；实验组凋亡相关蛋白bcl-2表达减少(0.551±0.190比1.416±0.139，t＝6.362，P＝0.003)，bax的表达增加(0.553±0.055比1.345±0.155，t＝8.335，P＝0.001)。
结论人食管癌细胞株Eca109沉默MUC1基因表达，可以导致细胞对顺铂耐药性下降。MUC1基因可能通过抑制凋亡激活途径，增加食管癌细胞对顺铂的耐药。
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