【摘 要】
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克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础.从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上
【机 构】
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江苏安惠生物科技有限公司,江苏南通,226009;南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095;江苏省苏微微生物研究有限公司,江苏无锡,214063
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克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础.从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析.该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定.将该载体转化人大肠杆菌BL21中,通过SDSPAGE电泳检测guaB基因的表达效果.克隆的guaB基因长度为1510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99％,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因.穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带.SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显.论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达.
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