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以鸡转化生长因子β-3（transforming growth factor beta-3,TGFB3）基因、猪朊蛋白（prion protein,PRNP）基因和鸭、牛生长激素（growth hormone,GH）基因为靶基因，设计合成特异性引物和Taq Man探针，通过对实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）体系和反应条件的优化，建立同时检测速冻食品中鸡、鸭、猪和牛源性成分的实时荧光PCR检测方法。结果表明：本研究所建立的方法只在鸡、鸭、猪或牛源性成分存在时才产生特异性扩增曲线，表明该方法具有良好的特异性；且对鸡、鸭、猪和牛源性成分的最低检测质量浓度分别可达到10.0、1.0、10.0、10.0 pg/μL，具有良好的灵敏性；应用建立的检测方法对市售34份速冻食品鸡、鸭、猪和牛源性成分进行同时检测，能够实现对速冻食品中4种动物源性成分的有效检测，进一步分析发现，15份速冻食品源性成分测定结果与外包装标注成分不一致。本研究所建立的同时检测速冻食品中鸡、鸭、猪和牛源性成分的实时荧光PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性，且操作简单、适用范围广，能够满足日常检测需求。