【摘 要】
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人上皮黏附因子(EpCAM)在多种上皮相关癌症表面过表达,介导肿瘤的增殖、分化、转移及信号传导等多种活动,是一种有潜力的癌症治疗靶点.本研究通过构建哺乳动物细胞表达载体,
【机 构】
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上海交通大学药学院,细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心,上海200240
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人上皮黏附因子(EpCAM)在多种上皮相关癌症表面过表达,介导肿瘤的增殖、分化、转移及信号传导等多种活动,是一种有潜力的癌症治疗靶点.本研究通过构建哺乳动物细胞表达载体,优化转染条件,使用瞬时基因表达技术在HEK293E细胞中表达了重组抗EpCAM人源化IgG1型单克隆抗体(rhEpCAM-mAb).抗体经纯化后,采用乳酸脱氢酶释放法初步鉴定了其介导的抗体依赖细胞毒作用.结果 表明,rhEpCAM-mAb在HEK293E细胞中以DNA∶PEI为1∶5,轻链∶重链为1∶3的最优条件进行瞬时表达时,抗体表达量可达46.05 mg/L,抗体对EpCAM的亲和力为5.56×10-12 mol/L,它对SK-OV-3、SW480和OVCAR-3细胞抗体依赖的细胞毒作用的IC50分别为12.36、5.43、102.90 ng/ml.本研究利用瞬时基因表达技术能够快速获得重组单克隆抗体,并对其生物活性进行研究,为生物技术药物开发及生产提供理论支持.
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