巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因GR1的分离克隆与鉴定

来源 :生物技术通讯 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zhoudddmmm

【摘要】

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目的：分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因。方法：PCR扩增LacZ基因，克隆至pPLC9载体，构建pPIC9-LacZ表达载体，经Sal I线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115，构建GS

【作者】

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姚学勤薛冲赵洪亮何庆孙博刘志敏

【机构】

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军事医学科学院生物工程研究所

【出处】

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生物技术通讯

【发表日期】

：

2009年4期

【关键词】

：

巴斯德毕赤酵母甘油阻遏限制酶介导整合技术 TAIL-PCR Pichia pastoris glycerol repression restrictio

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目的：分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因。方法：PCR扩增LacZ基因，克隆至pPLC9载体，构建pPIC9-LacZ表达载体，经Sal I线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115，构建GS115-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合（REMI）技术使GS115-LacZ菌体基因组产生随机突变，筛选甘油去阻遏的GS115-LacZ△菌体；Southern blot鉴定GS115-LacZ△基因组，用质粒拯救技术和TAIL-PCR克隆未知基因序列并测序。结果：得到甘油去阻遏的GS115-Lac

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