【摘 要】
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探究斑马鱼（Danio rerio） deltaD基因对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）家族基因vegfaa和flt4的调控作用。本研究通过红色荧光转基因斑马鱼系的成像发现deltaD纯合突变体的节间血管（intersegmental vessels， ISVs）出现了生长紊乱的现象，RT-qPCR实验检测到受精后1 dpf （d
【机 构】
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上海海洋大学国家海洋生物科学国际联合研究中心
【基金项目】
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教育部留学回国人员科研启动基金（D-8002-15-0042）； 水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究（A1-3201-19-3013）； 中美海洋研究中心基金（A1-0209-15-0806）共同资助；
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探究斑马鱼（Danio rerio） deltaD基因对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）家族基因vegfaa和flt4的调控作用。本研究通过红色荧光转基因斑马鱼系的成像发现deltaD纯合突变体的节间血管（intersegmental vessels， ISVs）出现了生长紊乱的现象，RT-qPCR实验检测到受精后1 dpf （day post fertilization， dpf ）大小的deltaD纯合突变体中VEGF家族的vegfaa配体和flt4受体基因的表达量均下调，且flt4基因的表达量显著性下调。之后应用双荧光素酶（Luciferase）实验体外验证deltaD基因对vegfaa和flt4的调控作用。利用加州大学圣克鲁兹分校基因组浏览器数据库获得斑马鱼deltaD、vegfaa及flt4基因序列，并成功构建表达载体p3xFLAG-CMV-deltaD和双荧光素酶报告基因表达载体pGL3-vegfaa-Luc、pGL3-flt4-Luc。双荧光素酶报告基因实验结果显示，pGL3-vegfaa-Luc和pGL3-flt4-Luc报告基因载体在HEK293T细胞中的荧光素酶活性分别约为对照组的92倍和3.9倍。进一步将p3xFLAG-CMV-deltaD分别与pGL3-vegfaa-Luc、pGL3-flt4-Luc转染至HEK293T细胞，与对照组相比其荧光素酶活性分别约为2.3倍和3.7倍。本研究明确了Notch信号通路的配体基因deltaD可以通过调控血管内皮生长因子家族中的vegfaa配体和flt4受体基因从而影响血管发育，为深入研究Notch信号通路在血管发育中的调控机制提供实验材料和科学依据。
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