葡萄MLO基因的克隆及白粉病胁迫下的表达分析

来源 :基因组学与应用生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhb_lzh_X
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MLO基因家族是一类植物特有的抗病负调控因子,其白粉病相关的MLO基因的隐性突变体mlo可产生对白粉病的广谱抗性。为了对葡萄中参与白粉病的候选基因MLO的功能筛选,本研究以新疆木纳格葡萄为材料,以拟南芥和大麦中白粉病抗病负调控基因MLO序列为参考,采用同源克隆技术对葡萄MLO同源基因进行克隆,并对所得序列进行生物信息学分析,利用半定量RT-PCR检测了所克隆的MLO基因在不同时段受葡萄白粉病诱导表达的情况。结果表明,成功克隆了葡萄的两个MLO同源基因,分别命名为VvMLO2 (NO:MK024674)、VvMLO3 (NO:MK024675),其开放阅读框(ORF)长度分别为1 620 bp和1 206bp,编码539、401个氨基酸,经生物信息学分析发现,2个VvMLO基因编码的氨基酸序列都具有跨膜结构域(TM1-TM7),符合MLO家族在植物中编码一个7次跨膜结构域的特性,同时还具有1个钙调蛋白结合区(CaMBD)及2个对识别白粉病菌起重要作用的缩氨酸保守区(Ⅰ和Ⅱ),2种预测蛋白不稳定指数均超过40,推测其为不稳定蛋白,系统进化树分析表明,这2个基因编码的氨基酸序列与拟南芥中已明确的白粉病感病基因MLO的聚在一起,预示着它们可能参与了葡萄对白粉病的感病性;木纳格葡萄经白粉病菌处理后,发现在前6 d,2个MLO基因都未表达,当第8 d时,只有VvMLO2基因表达出现上调现象,VvMLO3基因一直未表达,这说明VvMLO基因在木纳格葡萄中的表达存在一定的差异性。本研究为进一步确定葡萄中白粉病的抗病负调控基因奠定了重要的前期基础。
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