【摘 要】
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目的建立显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因的方法.方法设计4对地高辛标记引物,扩增结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA和ahpC 4个基因部分片段,根据结核分枝杆菌利福平(RFP)和
【机 构】
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盐城市第一人民医院检验科,江苏省盐城市第二人民医院检验科,中国科学院上海微系统与信息技术研究所
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目的建立显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因的方法.方法设计4对地高辛标记引物,扩增结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA和ahpC 4个基因部分片段,根据结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)4条耐药相关基因上8个位点的25种单核苷酸多态性设计探针制作芯片,扩增产物与芯片杂交,显色法判断结果;用该法检测46株结核分枝杆菌临床分离株.结果扩增产物琼脂糖电泳可见4条大小分别为165、181、245、315bpDNA条带;结核分枝杆菌菌液浓度为1.6×103/ml时,该法仍可检测到各位点野生及突变信号;19种非结核分枝杆菌标准株和9种非分枝杆菌标准株扩增产物无DNA条带,与芯片杂交亦无信号,H37Rv结核分枝杆菌标准株芯片检测各位点均为野生型;5株结核分枝杆菌临床分离株重复检测5次,结果完全一致;6份PCR产物的测序结果与芯片检测结果完全一致;46株结核分枝杆菌临床分离株中,RFP耐药株28株,芯片检出突变株24株,突变率为85.7%,RFP敏感株18株,芯片检出突变株2株.INH耐药株31株,芯片检出突变株20株,突变率为64.5%,INH敏感株15株,芯片检出突变株4株.结论显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因具有较高的敏感性和特异性,无需特殊仪器设备,有一定的推广应用价值.
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