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[摘 要]建立栀子金花丸中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱（60 cm× 75 μm，有效长度52 cm），以40 mmol·L-1硼砂溶液（pH9.0）为运行缓冲液；分离电压为12 kV；重力进样10 s（高度15 cm）；检测波长为280 nm；以对硝基苯甲酸为内标。结果 黄芩苷质量浓度在7.5～52.5 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系（r=0.999 6），黄芩苷平均回收率为96.7%，RSD值为1.62%（n=6）。结论 该方法专属性强，结果准确可靠、重现性好，可用于栀子金花丸的质量控制。
[关键词]毛细管电泳法；栀子金花丸；黄芩苷
中图分类号：TQ151.7文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）21-0247-01
栀子金花丸是由栀子、黄芩、黄连、黄柏等8味药材制成的中药成方制剂，具有清热泻火、凉血解毒之功效。临床用于肺胃热盛，口舌生疮，牙龈肿痛，目赤眩晕，咽喉肿痛，吐血衄血，大便秘结等的治疗。栀子金花丸的现行标准采用HPLC法测定制剂中栀子苷的含量，亦有其他文献报道采用HPLC法测定其中黄芩苷、栀子苷、绿原酸等成分的含量 ，但采用毛细管电泳法对栀子金花丸进行质量控制的方法尚未见报道。本文采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量，为更好地控制栀子金花丸质量提供了依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
CL1030型高效毛细管电泳仪（北京彩陆科学仪器有限公司），KNAUER K2501紫外-可见检测器（德国），HW2000色谱工作站2.17版（南京千谱软件有限公司）。ORION MODEL 828型pH计（美国）。DL 360超声波清洗器[宁波石浦海天电子仪器厂，频率（4.5±0.225）kHZ，功率240 W]。未涂层弹性融硅石英毛细管柱（河北锐年永沣色谱器件有限公司）。
1.2 试药
黄芩苷（中国药品生物制品检定所，批号110715-200815）。栀子金花丸（山东孔圣堂制药有限公司，批号090457、090546、090741，规格 9 g·袋-1）。甲醇为色谱纯；硼砂、对硝基苯甲酸、NaOH均为分析纯；水为双蒸水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 内标溶液的制备 精密称取对硝基苯甲酸适量，加水制成100 μg·mL-1的內标贮备液。
2.1.2 对照品贮备液的制备 精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品15 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（黄芩苷质量浓度为150 μg·mL-1）。
2.1.3 供试品溶液的制备 取栀子金花丸样品，研碎，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%（体积分数）甲醇50 mL，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用70%（体积分数）甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL至蒸发皿中，水浴挥干，再用70%（体积分数）甲醇溶解转移至10 mL量瓶中，加入内标溶液2.5 mL，用70%（体积分数）甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.1.4 阴性对照液的制备 取处方组成中除黄芩外的其余药材，制成不含黄芩的阴性对照品，按“2.1.3”项下方法处理，即得。
2.1.5 运行缓冲液的制备 精密称取硼砂适量，加水制成40 mmol·L-1硼砂溶液（pH=9.0），0.45 μm微孔滤膜滤过，作为运行缓冲液。
2.2 电泳条件
采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱（60cm×75μm，有效长度52cm）；以40 mmol·L-1硼砂溶液（pH9.0）为运行缓冲液；分离电压为12kV；重力进样10 s（高度15cm）；检测波长为280nm；温度为室温，湿度小于70%。毛细管柱在使用前依次用0.1mol·L-1 NaOH溶液和水冲洗15～20min，再用运行缓冲液冲洗约5 min。以对硝基苯甲酸为内标。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线的制备 分别吸取对照品贮备液适量，加甲醇稀释成黄芩苷质量浓度为7.5、15.0、22.5、30.0、37.5、45.0、52.5μg·mL-1，内标物质量浓度为25.0μg·mL-1的溶液。依次重力进样10s，每个浓度测定3次以上。以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标（Y），黄芩苷质量浓度（ρ）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=0.0350ρ-0.0383，r=0.999 6。表明黄芩苷在7.5～52.5μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.3.2 精密度试验 取质量浓度为30.0g·mL-1的黄芩苷对照品溶液，按“2.2”项下电泳条件，连续测定5次，记录峰面积并计算RSD值。结果黄芩苷峰面积的RSD=1.99%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液（批号090741），在0、2、4、6、8、12 h分别重力进样10 s，记录峰面积并计算RSD。结果黄芩苷峰面积的RSD=1.65%，表明供试品溶液在12h内稳定。
2.3.4 重复性试验 取同一批号（批号090741）的栀子金花丸样品6份，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果栀子金花丸中黄芩苷的平均含量为1.63 mg·g-1，RSD=1.62%（n=6）。表明重复性良好。
2.4 样品测定
取栀子金花丸样品3批，按“2.1.3”项下方法处理后依法测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中黄芩苷的含量。
3 讨论
3.1 提取方法的选择
参考有关文献中黄芩苷的提取方法，本实验先后以50%（体积分数）甲醇、70%（体积分数）甲醇、甲醇为溶剂进行超声提取。结果表明，样品采用70%（体积分数）甲醇超声提取基本完全，且黄芩苷与杂质峰分离度较好。同时考察了不同提取时间（30、40、50min）对提取效率的影响，结果显示超声40min时提取率已达最高，超声时间延长而提取率并未提高。因此，确定以70%（体积分数）甲醇为提取溶剂，超声提取40min。
3.2 内标物的选择
毛细管电泳有重现性差的缺点，因此采用内标法定量。苯甲酸钠、对氨基苯甲酸以及对硝基苯甲酸在280 nm波长处均有吸收。预实验结果表明，苯甲酸钠在体系中不出峰；对氨基苯甲酸灵敏度低，且出峰时间与黄芩苷过于接近，容易产生干扰；对硝基苯甲酸峰型好，虽出峰时间与黄芩苷接近，但在样品中无干扰，故选其作为内标物。
3.3 运行缓冲液的选择黄芩苷极性较强，容易离子化
而在硼砂溶液中，黄芩苷中邻二羟基基团更易形成络离子，加快离子化。因此选择硼砂溶液为运行缓冲液，并通过实验确定其最佳浓度为40 mmol·L-1。
3.4 采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷含量，与高效液相色谱法相比具有样品用量少，分析成本低等优点，并减少了对环境的污染，可用于栀子金花丸的质量控制
参考文献
[1] 国药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：879-880.
[2] 高晓燕，卢建秋.栀子金花丸中栀子苷、黄芩苷、番泻苷A和番泻苷B的含量测定方法研究[J].中国中药杂志，2009，34（20）：2649-2651.
[3] 宋粉云，龚红全，林琳，等.毛细管电泳法测定银黄胶囊及银黄颗粒中黄芩苷和绿原酸的含量[J].广东药学院学报，2007，23（3）：231-233.
[关键词]毛细管电泳法；栀子金花丸；黄芩苷
中图分类号：TQ151.7文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）21-0247-01
栀子金花丸是由栀子、黄芩、黄连、黄柏等8味药材制成的中药成方制剂，具有清热泻火、凉血解毒之功效。临床用于肺胃热盛，口舌生疮，牙龈肿痛，目赤眩晕，咽喉肿痛，吐血衄血，大便秘结等的治疗。栀子金花丸的现行标准采用HPLC法测定制剂中栀子苷的含量，亦有其他文献报道采用HPLC法测定其中黄芩苷、栀子苷、绿原酸等成分的含量 ，但采用毛细管电泳法对栀子金花丸进行质量控制的方法尚未见报道。本文采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量，为更好地控制栀子金花丸质量提供了依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
CL1030型高效毛细管电泳仪（北京彩陆科学仪器有限公司），KNAUER K2501紫外-可见检测器（德国），HW2000色谱工作站2.17版（南京千谱软件有限公司）。ORION MODEL 828型pH计（美国）。DL 360超声波清洗器[宁波石浦海天电子仪器厂，频率（4.5±0.225）kHZ，功率240 W]。未涂层弹性融硅石英毛细管柱（河北锐年永沣色谱器件有限公司）。
1.2 试药
黄芩苷（中国药品生物制品检定所，批号110715-200815）。栀子金花丸（山东孔圣堂制药有限公司，批号090457、090546、090741，规格 9 g·袋-1）。甲醇为色谱纯；硼砂、对硝基苯甲酸、NaOH均为分析纯；水为双蒸水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 内标溶液的制备 精密称取对硝基苯甲酸适量，加水制成100 μg·mL-1的內标贮备液。
2.1.2 对照品贮备液的制备 精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品15 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（黄芩苷质量浓度为150 μg·mL-1）。
2.1.3 供试品溶液的制备 取栀子金花丸样品，研碎，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%（体积分数）甲醇50 mL，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用70%（体积分数）甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL至蒸发皿中，水浴挥干，再用70%（体积分数）甲醇溶解转移至10 mL量瓶中，加入内标溶液2.5 mL，用70%（体积分数）甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.1.4 阴性对照液的制备 取处方组成中除黄芩外的其余药材，制成不含黄芩的阴性对照品，按“2.1.3”项下方法处理，即得。
2.1.5 运行缓冲液的制备 精密称取硼砂适量，加水制成40 mmol·L-1硼砂溶液（pH=9.0），0.45 μm微孔滤膜滤过，作为运行缓冲液。
2.2 电泳条件
采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱（60cm×75μm，有效长度52cm）；以40 mmol·L-1硼砂溶液（pH9.0）为运行缓冲液；分离电压为12kV；重力进样10 s（高度15cm）；检测波长为280nm；温度为室温，湿度小于70%。毛细管柱在使用前依次用0.1mol·L-1 NaOH溶液和水冲洗15～20min，再用运行缓冲液冲洗约5 min。以对硝基苯甲酸为内标。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线的制备 分别吸取对照品贮备液适量，加甲醇稀释成黄芩苷质量浓度为7.5、15.0、22.5、30.0、37.5、45.0、52.5μg·mL-1，内标物质量浓度为25.0μg·mL-1的溶液。依次重力进样10s，每个浓度测定3次以上。以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标（Y），黄芩苷质量浓度（ρ）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=0.0350ρ-0.0383，r=0.999 6。表明黄芩苷在7.5～52.5μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.3.2 精密度试验 取质量浓度为30.0g·mL-1的黄芩苷对照品溶液，按“2.2”项下电泳条件，连续测定5次，记录峰面积并计算RSD值。结果黄芩苷峰面积的RSD=1.99%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液（批号090741），在0、2、4、6、8、12 h分别重力进样10 s，记录峰面积并计算RSD。结果黄芩苷峰面积的RSD=1.65%，表明供试品溶液在12h内稳定。
2.3.4 重复性试验 取同一批号（批号090741）的栀子金花丸样品6份，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果栀子金花丸中黄芩苷的平均含量为1.63 mg·g-1，RSD=1.62%（n=6）。表明重复性良好。
2.4 样品测定
取栀子金花丸样品3批，按“2.1.3”项下方法处理后依法测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中黄芩苷的含量。
3 讨论
3.1 提取方法的选择
参考有关文献中黄芩苷的提取方法，本实验先后以50%（体积分数）甲醇、70%（体积分数）甲醇、甲醇为溶剂进行超声提取。结果表明，样品采用70%（体积分数）甲醇超声提取基本完全，且黄芩苷与杂质峰分离度较好。同时考察了不同提取时间（30、40、50min）对提取效率的影响，结果显示超声40min时提取率已达最高，超声时间延长而提取率并未提高。因此，确定以70%（体积分数）甲醇为提取溶剂，超声提取40min。
3.2 内标物的选择
毛细管电泳有重现性差的缺点，因此采用内标法定量。苯甲酸钠、对氨基苯甲酸以及对硝基苯甲酸在280 nm波长处均有吸收。预实验结果表明，苯甲酸钠在体系中不出峰；对氨基苯甲酸灵敏度低，且出峰时间与黄芩苷过于接近，容易产生干扰；对硝基苯甲酸峰型好，虽出峰时间与黄芩苷接近，但在样品中无干扰，故选其作为内标物。
3.3 运行缓冲液的选择黄芩苷极性较强，容易离子化
而在硼砂溶液中，黄芩苷中邻二羟基基团更易形成络离子，加快离子化。因此选择硼砂溶液为运行缓冲液，并通过实验确定其最佳浓度为40 mmol·L-1。
3.4 采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷含量，与高效液相色谱法相比具有样品用量少，分析成本低等优点，并减少了对环境的污染，可用于栀子金花丸的质量控制
参考文献
[1] 国药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：879-880.
[2] 高晓燕，卢建秋.栀子金花丸中栀子苷、黄芩苷、番泻苷A和番泻苷B的含量测定方法研究[J].中国中药杂志，2009，34（20）：2649-2651.
[3] 宋粉云，龚红全，林琳，等.毛细管电泳法测定银黄胶囊及银黄颗粒中黄芩苷和绿原酸的含量[J].广东药学院学报，2007，23（3）：231-233.