【摘 要】
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为了定量检测口蹄疫病毒(FMDV)的正链和负链RNA,揭示FMDV复制的分子机制,试验采用链特异性荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR)方法提取了FMDV的RNA,在FMDV链特异性反转录引物的5’端
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院; 山东省农业科学院奶牛研究中心; 天津武清海林养殖场; 军事医学科学院军事兽医研究所; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31272586;31302095);现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位项目(Cars-37);山东省农业重大应用技术创新项目;山东省自然科学基金培养项目(ZR2014CP029);山东省科技发展计划项目(2014GGC02058);山东省农业科学院科技创新重点项目(2014CXZ08-3);山东省农业科学院重大成果培育项目(2015CGPY02);兽医生物技术国家重
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为了定量检测口蹄疫病毒(FMDV)的正链和负链RNA,揭示FMDV复制的分子机制,试验采用链特异性荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR)方法提取了FMDV的RNA,在FMDV链特异性反转录引物的5’端引入非病毒基因序列标签进行反转录,再经链特异性ssqRT-PCR扩增进行灵敏性、特异性、重复性检测。结果表明:FMDV基因组正链、负链RNA的链特异性ssqRT-PCR方法构建成功,该方法对FMDV正链和负链RNA检测的灵敏度达到1×101拷贝,具有较好的重复性和特异性。
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