【摘 要】
：
背景:神经干细胞是一群可以自我增殖并具有多向分化潜能的细胞.子宫内电穿孔转染可将RNA或质粒瞬时转入活体小鼠神经干细胞内对目的基因进行干扰或过表达,是目前活体研究大脑皮质发育的最直接可靠的研究方法.目的:以胚胎小鼠脑室管膜下区的神经干细胞为目标,以增强型绿色荧光蛋白作为报告基因,优化子宫内电穿孔转染的条件,为研究大脑皮质的发育提供更加有效的方法.方法:将成年ICR小鼠以1只雄鼠和3只雌鼠的比例进行交配,晚上8点将小鼠合笼,第2天早晨8点查验雌鼠阴栓,将有阴栓的雌鼠计为怀孕0.5 d.待怀孕14 d(E14
【机 构】
：
解放军总医院第一医学中心神经外科医学部派驻第七医学中心神经外科,北京市 100700;苏州大学附属第一医院骨科,江苏省苏州市 215000;苏州大学附属张家港市第一人民医院,江苏省张家港市 21560
论文部分内容阅读
背景:神经干细胞是一群可以自我增殖并具有多向分化潜能的细胞.子宫内电穿孔转染可将RNA或质粒瞬时转入活体小鼠神经干细胞内对目的基因进行干扰或过表达,是目前活体研究大脑皮质发育的最直接可靠的研究方法.目的:以胚胎小鼠脑室管膜下区的神经干细胞为目标,以增强型绿色荧光蛋白作为报告基因,优化子宫内电穿孔转染的条件,为研究大脑皮质的发育提供更加有效的方法.方法:将成年ICR小鼠以1只雄鼠和3只雌鼠的比例进行交配,晚上8点将小鼠合笼,第2天早晨8点查验雌鼠阴栓,将有阴栓的雌鼠计为怀孕0.5 d.待怀孕14 d(E14)时腹腔注射Ketamin(120 mg/kg)和Xylazine(10 mg/kg)麻醉孕鼠,剃掉孕鼠腹部毛发,打开腹腔,不剪开孕鼠子宫,用ECM803电穿孔转染仪和BTX电极在不同的电压下将pEx-4-eGFP质粒在电场的作用下瞬时转入胎鼠脑室管膜下区的神经干细胞内.转染3 d后取出转染小鼠脑组织进行冰冻切片,观察增强型绿色荧光蛋白在大脑皮质上的表达,统计绿色荧光蛋白阳性细胞数来评估转染效率.结果 与结论:①电转电压在38,40,42,45 V时小鼠存活及转染效果不同,38 V电压对胎鼠的致死性较小,但是转染效率较低,在42 V电压下电转的小鼠可存活,且电转的脑组织中绿色荧光蛋白荧光强度高于40 V电压,但是45 V电压对小鼠的致死性较大.因此,42 V电压是一个较好的电转条件.②在电压42 V条件下,脉冲数由5个改为8个后绿色荧光蛋白阳性细胞更多,荧光更亮.③改良后的电转条件对转染成功的细胞生长无影响.
其他文献
背景:丰富环境干预对认知损伤有一定的改善作用,谷氨酸是与认知密切相关的兴奋性氨基酸,丰富环境对卒中后小鼠谷氨酸受体的影响和机制尚不明确.目的:探讨代谢型谷氨酸受体在丰富环境改善卒中后认知功能障碍中的作用及其相关机制.方法:采用光栓法制作小鼠脑卒中模型,通过Y迷宫与假手术组小鼠对比,筛选出具有认知障碍的小鼠.按随机数字表法将实验小鼠分为3组,即假手术组(假手术+标准环境组)、卒中后认知障碍+标准环境组、卒中后认知障碍+丰富环境组.各组小鼠在相应环境下分别饲养14 d后,采用Y迷宫检测小鼠额叶工作记忆能力,新
背景:牙根吸收是正畸治疗中最常见的并发症,也是当前正畸研究中的热点,目前关于牙根吸收过程中不同时间点下牙周组织胶原纤维的重塑过程及其与基质金属蛋白酶9的关系尚不清楚.目的:研究在正畸源性牙根吸收过程中,压力侧不同时间点牙周组织中胶原纤维重塑和基质金属蛋白酶9的表达情况.方法:选取30只8周龄雄性Wistar大鼠,牵拉左侧上颌第一磨牙向近中移动,建立正畸牙移动模型(实验组),右侧第一磨牙不做任何处理(对照组).加力后1,3,5,7,14,21 d,利用组织形态学技术观察分析牙槽骨和牙根表面、牙周组织胶原纤维
背景:抗瓜氨酸化蛋白抗体是类风湿关节炎特异性、早期诊断标志物,与类风湿关节炎发生发展及骨破坏的加重密切相关,该类抗体阳性患者的病情比阴性患者更严重而且更难治疗.胶原诱导型关节炎和佐剂诱导型关节炎等是典型的2种类风湿关节炎动物模型,但都不表达或不能稳定高水平表达抗瓜氨酸化蛋白抗体,从而严重影响了抗瓜氨酸化蛋白抗体阳性类风湿关节炎发病机制和治疗药物研发的深入研究.目的:通过查阅国内外相关文献,综合分析抗瓜氨酸化蛋白抗体高表达的类风湿关节炎动物模型的研究现状,指出存在问题并提出建议.方法:以“Rheumatoi
背景:氧化应激被认为是骨质疏松发生的最重要的始动因素之一,氧化应激除直接激活经典的线粒体和内质网凋亡途径外,还激活细胞自噬信号通路,而骨质疏松发病中成骨细胞抗氧化功能的调控机制并未被清晰阐述.目的:探讨补肾健脾活血方改善氧化应激与自噬对骨质疏松大鼠磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的影响.方法:72只6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组24只及手术组48只,去除卵巢造模;术后3个月两组各取12只检测骨密度及血清中骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原N端前肽、骨保护素水平.剩余手术组的3
背景:苦寒中药川楝子具有小毒,对生长环境要求不高,在实体瘤中能显著抑制肿瘤细胞的增殖,但在血液肿瘤中报道较少,基于前期研究结果,并结合中医“以毒攻毒”理论探讨其主要成分川楝素抗急性淋巴细胞白血病的作用机制.目的:探究川楝子醇提物抑制白血病CEM细胞增殖的作用机制.方法:人急性T淋巴细胞白血病CEM细胞培养至对数生长期,经5种浓度梯度川楝子醇提物作用24,48,72 h后,通过MTT实验求得各组细胞抑制率.考虑到受渗透压影响并保证后续实验的开展,筛选出川楝子醇提物低、中、高质量浓度(16,80,400 mg
背景:目前临床上对于后壁破裂骨质疏松性骨折的治疗存在较大争议,部分学者认为是骨水泥强化的手术禁忌,适合行切开复位内固定治疗;但亦有部分学者认为骨质疏松容易导致内固定失败,在合适的条件下可以行微创骨水泥强化治疗.目的:探讨骨水泥强化治疗无神经症状后壁不完整骨质疏松性椎体骨折的临床疗效.方法:回顾性分析2011年1月至2013年6月苏州大学附属第一医院收治的,31例无神经症状后壁不完整骨质疏松性椎体骨折患者的病历资料,其中男12例,女19例,年龄为57-82岁,均进行椎体球囊扩张骨水泥强化治疗,术后评价骨水泥
背景:类风湿关节炎患者存在胃肠动力不足的问题逐渐受到关注,针灸作为类风湿关节炎的一种治疗方法,是否能够改善其胃肠动力不足的问题,值得进一步探究.目的:制备佐剂性关节炎大鼠模型,探讨针灸足三里对大鼠胃肠动力的影响.方法:将60只清洁级健康3月龄雌性SD大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、针刺组、艾灸组和针+灸组,每组12只,除正常组外其余4组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂性关节炎模型.针刺组、艾灸组和针+灸组于造模第1天取足三里穴治疗,15 min/次,1次/d,一共14 d.针刺组大鼠采用针刺干预,艾灸组大鼠
背景:长跑训练中流行的观点是通过提高步频可以提高跑步效率,这需要多方面的科学评价及研究.目的:通过比较个体无氧阈强度下自选步频与改变步频后机体的心率、摄氧量、表面肌电和步态特征的变化,探究改变步频对跑者产生的影响,为提高跑步效率提供科学策略.方法:选择12名男性马拉松跑步爱好者.在试验开始前,首先通过跑台递增负荷试验进行有氧能力测试,得到跑者的通气无氧阈及无氧阈速度.在正式试验开始后,采用随机交叉设计,在无氧阈跑速下,进行自选步频、自选步频±5％和自选步频±10％跑台测试.使用配对t检验和皮尔逊相关分析等
背景:已有相关研究报道,瘦素与细胞信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)表达异常在青少年特发性脊柱侧凸畸形发病中起重要作用.目的:探讨SOCS3是否通过瘦素信号传导通路调节软骨细胞内成骨活性.方法:①将人棘突软骨细胞分别以0(对照组),100μg/L瘦素刺激24 h,免疫组化染色观察Ⅱ型胶原表达.②将人棘突软骨细胞分9组培养,分别为空白对照组、转染pcDNA3.1-NC组、转染pcDNA3.1-SOCS3组、转染siRNA-NC组、转染siR
背景:咬合治疗是对颞下颌关节紊乱的一种保守治疗方法,具有较久的治疗历史,但是其疗效也具有不少争议,患者病情极易复发.传统中医药治疗颞下颌关节紊乱取得了良好的疗效,并逐渐得到大家的关注.目的:探讨活血化瘀汤与跌打万花油热敷结合咬合板对颞下颌关节紊乱患者的治疗作用以及对患者患侧软组织张力的影响.方法:选择2017年1月至2019年10月在中南大学湘雅医学院附属海口医院进行治疗的60例颞下颌关节紊乱患者,随机分为2组,每组30例.对照组患者上颌佩戴稳定性咬合板进行治疗,观察组患者在对照组的基础上结合活血化瘀汤和