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目的 构建3种牛支原体P81蛋白原核表达质粒,分析其在大肠埃希菌中的表达情况,并纯化P81蛋白. 方法 根据GenBank发表的牛支原体P81基因序列(GenBank登录号:AY627040.1),密码子优化后合成P81全基因序列.构建原核表达质粒pET28a-P81、pET32a-P81和pGEX-6P-1-P81,经IPTG诱导后采用SDS-PAGE电泳分析P81蛋白在原核表达系统中的表达情况;应用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化. 结果 pET28a-P81、pET32a-P81和pGEX-6P-1-P81均高效表达分子质量单位为78 ku左右的P81蛋白.表达产物进行Ni-NTA亲和层析,得到纯化的P81蛋白.结论 构建的重组原核表达质粒pET28a-P81、pET32a-P81、pGEX-6P-1-P81能在大肠埃希菌中高效表达牛支原体P81蛋白,为进一步分析该蛋白的抗原性奠定了基础.