Kdm2b基因敲入双loxp序列的NIH3T3细胞株的构建

来源 :山东医药 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liweibin522

【摘要】

：

目的利用CRISPR/Cas9技术与同源重组技术在组蛋白去甲基化酶Kdm2b基因的特定位置敲入双loxp序列,为后期制备条件性敲除鼠及基因功能研究提供基础。方法利用CRISPR/Cas9靶向性

【作者】

：

陈素珠卢文显林典梁杜生荣林运鸿郑备红

【机构】

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福建省妇幼保健院福建医科大学附属医院,福建医科大学转化医学研究院

【出处】

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山东医药

【发表日期】

：

2020年32期

【关键词】

：

组蛋白去甲基化酶 Kdm2b基因条件性基因敲除基因编辑 CRISPR/Cas9系统 Cre-loxp系统 histone demethylaseKdm2b

【基金项目】

：

福建省自然科学基金资助项目(2018J01233),国家重点研发计划(2018YFC1002105),福建省妇幼保健院院内课题(妇保院研17-29)

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目的利用CRISPR/Cas9技术与同源重组技术在组蛋白去甲基化酶Kdm2b基因的特定位置敲入双loxp序列,为后期制备条件性敲除鼠及基因功能研究提供基础。方法利用CRISPR/Cas9靶向性原理,根据Kdm2b基因第7个外显子的5臂端和第9个外显子的3臂端设计两个sgRNA,构建sgRNA-PX459重组质粒。从Kdm2b基因上克隆出同源臂,将同源臂插入带有loxp序列的Vector 5中,利用引物从Vector 5质粒克隆得到loxp-同源臂序列的双链Donor DNA。通过脂质体转染将sgRNA-P

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