【摘 要】
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目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组，NAC,2.5 mmol/L）以及金丝桃苷组（50、100、200μmol/L），各组按剂量孵育48 h后，除正常组外其余各组细胞加入H2O2（150μmol/L）处理2 h，正常组给予等容量培养基。采
【机 构】
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安徽中医药大学中西医结合学院药理学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金（82174162）～～；
论文部分内容阅读
目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组，NAC,2.5 mmol/L）以及金丝桃苷组（50、100、200μmol/L），各组按剂量孵育48 h后，除正常组外其余各组细胞加入H2O2（150μmol/L）处理2 h，正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量，Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平，免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较，模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低，MDA含量、细胞凋亡率，Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P＜0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，NAC组和金丝桃苷200μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高，MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P＜0.05）；金丝桃苷200μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降，HO-1 mRNA表达显著升高（P＜0.01）；金丝桃苷200μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P＜0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P＜0.01）；金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P＜0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路，对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。
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