【摘 要】
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目前，在对螯虾、对虾等甲壳动物细胞的研究中，广泛采用了适用于哺乳动物细胞或昆虫细胞的各类缓冲液和培养液。但是，甲壳动物体液的渗透压与哺乳动物等有很大差异，直接沿用哺乳动物等细胞的缓冲系统不合适。本研究首先测定了红螯螯虾（Cherax quadricarinatus）、克氏原螯虾（Procambarus clarkii）,与饲养在盐度30海水中的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）
【机 构】
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自然资源部第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（31672675）；
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目前，在对螯虾、对虾等甲壳动物细胞的研究中，广泛采用了适用于哺乳动物细胞或昆虫细胞的各类缓冲液和培养液。但是，甲壳动物体液的渗透压与哺乳动物等有很大差异，直接沿用哺乳动物等细胞的缓冲系统不合适。本研究首先测定了红螯螯虾（Cherax quadricarinatus）、克氏原螯虾（Procambarus clarkii）,与饲养在盐度30海水中的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的血清渗透压，其值分别为（409±12）、（465±8）、（704±15） mOsmol/kg。随后，通过调节NaCl的浓度来改变抗凝剂和磷酸盐缓冲液（PBS）的渗透压，使其与相应动物的血清渗透压相等。优化后适用于红螯螯虾的抗凝剂和PBS中，NaCl的浓度分别为70、200 mmol/L;适用于克氏原螯虾的抗凝剂和PBS中，NaCl的浓度分别为100、230 mmol/L;适用于凡纳滨对虾的抗凝剂和PBS中，NaCl的浓度分别为220、360 mmol/L。进一步比较了3种动物的血细胞在不同渗透压缓冲液中的存活情况。结果表明，红螯螯虾、克氏原螯虾以及凡纳滨对虾这3种甲壳动物的血细胞在未优化的PBS中处理15 min,死亡率就分别达到4.5%、2.0%以及10.0%左右；然而当使用优化后的PBS进行处理时，死亡率则分别降至1.0%、1.0%以及2.0%左右。而血细胞在抗凝剂中的死亡率则较低（＜2.0%）,优化前后没有显著差异。综上，在甲壳动物活细胞实验中采用优化后的缓冲液，能改善细胞的状态，提高实验的准确性。
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