【摘 要】
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目的 探讨细菌外膜囊泡(OMVs)肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8+T细胞浸润的影响.方法 采用实验研究方法.采用卵清蛋白(OVA)慢病毒载体质粒pLV-Efla-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro构建小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞;采用大肠杆菌来源ClyA-Catchers-OMVs(CC-OMVs)与标签化抗原肽SpyTag-OVA制备OMVs肿瘤疫苗;应用OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠CD8+T细胞生成,采用体外细胞杀伤实验(OMVs肿瘤疫苗刺
【机 构】
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天津医科大学肿瘤医院胰腺肿瘤科 国家肿瘤临床医学研究中心天津市“肿瘤防治”重点实验室天津市恶性肿瘤临床医学研究中心,天津 300060;中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室 国家纳米科学中心,北京
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目的 探讨细菌外膜囊泡(OMVs)肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8+T细胞浸润的影响.方法 采用实验研究方法.采用卵清蛋白(OVA)慢病毒载体质粒pLV-Efla-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro构建小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞;采用大肠杆菌来源ClyA-Catchers-OMVs(CC-OMVs)与标签化抗原肽SpyTag-OVA制备OMVs肿瘤疫苗;应用OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠CD8+T细胞生成,采用体外细胞杀伤实验(OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组和对照T细胞组)、小鼠皮下胰腺癌成瘤模型(OMVs肿瘤疫苗组和对照组)和免疫组织化学染色检测分析OMVs肿瘤疫苗抑制胰腺癌细胞增殖,刺激CD8+T细胞浸润的效果.观察指标:(1)小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况.(2)CC-OMVs形态观察情况.(3)OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况.(4)OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况.(5)OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8+T细胞浸润情况.正态分布的计量资料以(x)±s表示,组间比较采用t检验.计数资料以绝对数或百分率表示.结果 (1)小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况.激光共聚焦检测结果显示:感染OVA 慢病毒载体质粒 pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro的小鼠胰腺癌 Pan02-OVA细胞表达mNeongreen绿色荧光.流式细胞检测结果显示:以小鼠胰腺癌Pan02细胞为参照,Pan02-OVA细胞Flag蛋白表达率为90.7％.(2)CC-OMVs形态观察情况.透射电子显微镜检测结果显示:CC-OMVs呈均匀球形,直径＜50 nm.(3)OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况.细胞增殖毒性检测结果显示:OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞450nmn吸光度为0.41±0.12,对照T细胞组为1.05±0.15,两组比较,差异有统计学意义(t=9.54,P＜0.05).(4)OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况.OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织质量为(81±10)g,对照组为(153±17)g,两组比较,差异有统计学意义(t=8.26,P＜0.05).(5)OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8+T细胞浸润情况.免疫组织化学染色检测结果显示:OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织中CD8+T细胞染色数目为(28.7±3.5)个,对照组为(9.3±1.5)个,两组比较,差异有统计学意义(t=8.74,P＜0.05).结论 细菌OMVs肿瘤疫苗可抑制胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖并提高肿瘤组织中CD8+T细胞浸润数目.
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