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利用奶牛rDNA基因间的ITS重复序列作为靶位点，对奶牛胎儿成纤维细胞进行多位点基因打靶，建立以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术，并为克隆定点转基因奶牛提供核供体。首先分离培养出奶牛胎儿成纤维细胞，并进行性别鉴定和核型分析。采用MTT比色法确定了G418和GCV正负筛选的最低有效浓度。然后通过多位点基因打靶载体转染、正负筛选获得7个表达绿色荧光的克隆细胞系，经PCR,RT—PCR和测序证实其中1个细胞系为定点整合的克隆细胞系，且GFP基因表达。