【摘 要】
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目的 探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响.方法 对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率.将FLS分为阴性对照组(NC组)、Overexpress组,并用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(20 ng/ml)刺激.另取正常大鼠FLS为对照组(Control),给予同浓度(100 ng/ml) MTX和OAT1特异性底物对氨基马尿酸(PA
【机 构】
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安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,抗炎免疫药物安徽省协同创新中心,合肥230032
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目的 探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响.方法 对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率.将FLS分为阴性对照组(NC组)、Overexpress组,并用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(20 ng/ml)刺激.另取正常大鼠FLS为对照组(Control),给予同浓度(100 ng/ml) MTX和OAT1特异性底物对氨基马尿酸(PAH),采用UPLC-MS/MS方法评估FLS对MTX及PAH吸收功能.给予MTX(100 ng/ml)后使用CCK-8、Transwell方法检测FLS增殖效应及迁移能力.结果 与NC组相比,Overexpress组的OAT1及Slc22a6表达均上升;与NC组比较,OAT1过表达组FLS对MTX和PAH的吸收在15、30、45、60、120 min时均增加;与NC组比较,Overexpress组FLS的增殖效应在12 h时下降,并趋近于Control组水平;与NC组比较,12 h时OAT1过表达组的迁移能力下降,并趋近于Control组水平.结论 OAT1表达的升高能增加炎性FLS对MTX的吸收,并可抑制其异常的增殖效应和迁移能力.
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