【摘 要】
：
试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体(FXR)基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响.根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外
【机 构】
：
吉林大学动物医学学院,人兽共患病研究所,长春130062
论文部分内容阅读
试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体(FXR)基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响.根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),以PX459质粒为载体,构建真核重组表达质粒.酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,再用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞FXR基因敲除稳定株中FXR的表达量,并用Western blotting方法鉴定HeLa细胞FXR基因敲除效果.最后用结晶紫染色试验检测FXR基因敲除对HeLa细胞增殖的影响.结果显示,经测序后,3对sgRNA位置与方向均正确插入到PX459质粒载体内,成功构建出重组表达质粒PX459-sgRNA;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,转染后筛选出的细胞中FXR蛋白不表达,表明构建出稳定敲除FXR基因的HeLa细胞株;结晶紫试验结果发现,FXR基因敲除的HeLa细胞染色深度明显低于正常HeLa细胞,FXR基因敲除HeLa细胞孔D595nm值极显著低于野生型HeLa细胞孔(P＜0.01),说明HeLa细胞FXR基因敲除株的增殖能力较正常HeLa细胞显著降低.本试验利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源FXR基因敲除细胞株,且FXR基因敲除对癌细胞增殖具有显著抑制作用,为研究FXR的功能和作用机制提供了细胞模型,并为研究FXR在相关癌症发生发展中的作用奠定了基础.
其他文献
介绍了光无线数字通信的应用规模，探讨了基于红外线的光无线局域网的ＩｒＤＡ协议、组成方式，给出一种基于ＲＳ２３２接口的计算机间无线光数据通信设计实例，实现了数据率为９６００ｂｉｔ／ｓ，通信距离为０．５ｍ的光无线通信
中国房地产管理无法可依的局面已经结束,7月5日,《中华人民共和国城市房地产管理法》在八届人大常委会第八次会议上,经过126位常委会组成人员的认识审议,以96票获得通过。随
遵照伟大领袖毛主席关于“人类总得不断地总结经验,有所发现,有所发明,有所创造,有所前进”的教导,我县根据本地的情况,试验了一种圆形三合土竹筋结构的沼气池(图1,2,3),这
摘要：记忆是人脑对经历过的事物的反映。人们过去见过的、听过的、嗅过的、尝过的、触摸过的、思考过的、体验过的对象及动作等，都可以在头脑里留下痕迹，以后还会再现或回忆出来，这都是记忆现象。从信息论的观点出发，记忆就是对信息的输入、编码、储存和提取的过程。记忆是人们进行心理活动的基本条件，也是人们心理发展的基本条件。记忆在智力结构中占有重要地位，是智力活动的基础。人的智力结构中的诸因素都离不开记忆，没有
大学物理作为高校一门基础课,对于培养大学生的素质和能力有着不可替代的作用.本文笔者结合教学实践经验,探讨了激发学生学习兴趣,提高大学物理课堂教学效果的几种方法，包括将
为了调查运输应激对伊犁马血细胞和血液生化指标的影响,试验选取6匹伊犁母马,进行400 km里程的运输,总运输时间为8 h,分别在运输0、4、8 h和落地12 h后,测定马血清急性期蛋白
详细地定量分析了降水估测中的ＺＲ关系和各类误差。由此可知，指数函数形式与幂函数形式的ＺＲ关系之间无明显差别；ＺＨ的参数因子ＡＨ不能太大；双线偏振雷达的测量误差导致的降雨强度估测误
本文作者根据我省安吉南湖林场十二中队的1800亩油茶林六年的产量,与当地油茶花期的相关性,而得出的一项根据油茶花期积温来予测产量的经验公式,具有一定的实践和理论依据。
从事轻工产品的进出口业务多年，我曾经出访过许多国家。20世纪80年代，轻工产品的传统市场是东南亚等地。但是，市场竞争的不断加剧要求我们必须开拓新的市场。对我们来说，南非是一块未开垦的宝地，但是，由于时局的限制，我们当时唯一可采取的途径，便是绕道莱索托的曲线贸易方式。 1988年我出访莱索托，在南非约翰内斯堡转机，乘坐的是一架12座小飞机，驾驶室和乘员舱当中没有隔离，能清晰地看到驾驶员操纵飞机腾空
试验旨在了解猪链球菌4型(Streptococcussuis serotype 4,SS4)转录调控因子GalR蛋白生物学信息并对其进行原核表达.使用相关生物信息学分析网站对SS4 SH1510菌株GalR蛋白进行