【摘 要】
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为了给非洲猪瘟的临床诊断技术和实验室研究提供物质基础,本研究以我国首次分离的非洲猪瘟病毒(ASFV) Pig/HLJ/2018株基因组为模板,扩增pA104R基因,并将其克隆至pET-30a载体,构建重组原核表达质粒pET-30a-A104R,表达并纯化重组pA104R蛋白(rpA104R),以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb),并采用ELISA、western blot、间接免疫荧光法(IFA)和免疫组化(IHC)对所获得的MAb进行鉴定.结果 显示,正确构建pET-30a-A104R
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069
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为了给非洲猪瘟的临床诊断技术和实验室研究提供物质基础,本研究以我国首次分离的非洲猪瘟病毒(ASFV) Pig/HLJ/2018株基因组为模板,扩增pA104R基因,并将其克隆至pET-30a载体,构建重组原核表达质粒pET-30a-A104R,表达并纯化重组pA104R蛋白(rpA104R),以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb),并采用ELISA、western blot、间接免疫荧光法(IFA)和免疫组化(IHC)对所获得的MAb进行鉴定.结果 显示,正确构建pET-30a-A104R重组质粒,并获得大小约为12 ku的可溶性蛋白.通过间接ELISA方法筛选到2株阳性杂交瘤细胞株为4G2和4E10,并且2株MAb的重链均为IgG1,轻链为Kappa链.Western blot和IFA结果显示,MAb 4G2株能够特异性地识别ASFV pA104R蛋白和病毒感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的pA104R蛋白.IHC结果表明,MAb 4G2可以与病毒感染的阳性猪组织发生特异性反应.本研究也为ASFV基因缺失疫苗的开发提供了技术储备.
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