荧光实时定量PCR检测单核李斯特菌方法学建立及应用

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目的建立检测单核细胞增多性李斯特菌的荧光定量PCR方法,并利用此方法检测人工污染的牛奶中单增李斯特菌菌量.方法选择单增李斯特菌特异性的基因ListeriolysinO基因为靶目标设计引物,采用煮沸法抽提纯单增李斯特菌株(1/2a)DNA,建立SYBRGREEN实时定量PCR检测体系.结果定量PCR对李斯特菌可产生特异扩增信号,对其他菌(大肠杆菌)无响应.标准曲线的相关系数为0.9521.最小检菌量约为100个菌落形成单位/反应体系.在人为污染牛奶检测中,与传统细菌计数方法结果相比,相关系数为0.839.结
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