【摘 要】
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目的:探讨星形胶质细胞（astrocyte,ASC）的缝隙连接蛋白Connexin43（Cx43）在调控细胞凋亡和铁死亡中的作用及机制。方法:采用氧化血红素（hemin）处理ASC建立模拟脑出血后细胞凋亡和铁死亡的细胞模型,通过干扰慢病毒敲降ASC中Cx43表达,观察细胞对hemin诱导的凋亡和铁死亡的敏感性。通过基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金资助项目（81901250）； 广东省自然科学基金资助项目（2019A1515010104）； 广东省人民医院高水平医院建设登峰计划——青苗项目（DFJH201924）；
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目的:探讨星形胶质细胞（astrocyte,ASC）的缝隙连接蛋白Connexin43（Cx43）在调控细胞凋亡和铁死亡中的作用及机制。方法:采用氧化血红素（hemin）处理ASC建立模拟脑出血后细胞凋亡和铁死亡的细胞模型,通过干扰慢病毒敲降ASC中Cx43表达,观察细胞对hemin诱导的凋亡和铁死亡的敏感性。通过基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）预测Cx43参与调控细胞凋亡和铁死亡的可能机制。通过对Hippo信号通路的关键效应分子Yes相关联蛋白（Yes associated protein,YAP）进行免疫荧光染色以及使用抑制剂干预,对生信分析预测的信号通路进行验证。结果:与对照组相比,hemin处理引起细胞凋亡和铁死亡比例显著增加（P＜0.05）,在接受hemin处理的各组中,相比单纯hemin处理组和阴性对照组（Cx43 NC）,Cx43敲降组（Cx43 KD）细胞凋亡比例显著降低（P＜0.05）,铁死亡比例显著升高（P＜0.05）。生信分析结果显示,Cx43与Hippo信号通路、铁离子结合基因集、脂质过氧化通路、缺氧应激等通路显著相关,进一步转录因子调控网络分析发现转录增强相关结构域（transcriptional enhanced associate domain,TEAD）转录因子家族中TEAD3可能参与调控Cx43相关性下游信号转导通路。免疫荧光染色结果显示,Cx43KD组YAP出现核转位,采用抑制剂阻断YAP和TEAD结合后,Cx43敲降引起的细胞凋亡抵抗和铁死亡增敏得到部分逆转。结论:Cx43敲降通过抑制Hippo通路,促进YAP核转位,与TEAD3结合形成转录复合体,调控ASC对hemin诱导的细胞凋亡抵抗和铁死亡增敏。
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